丹参酮ⅡA磺酸钠对马立克氏病病毒（MDV）复制机制的影响

【摘要】：目的：检测丹参酮ⅡA磺酸钠(Sodium Tanshinone ⅡA Sulfonate, STS)对鸡马立克氏病病毒(Marek's disease virus, MDV) UL27 (gB)基因的合成和gB糖蛋白表达的影响,以及对病毒Meq基因表达量的影响,初步探讨STS抗病毒作用的机制,为抗病毒作用机制的深入研究奠定理论基础。方法：本试验建立MDV感染体外模型,以MDV-1中具有高度保守序列的UL27基因和Meq基因为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)分别在MDV感染细胞内加药后24 h、48 h、72 h、96h检测DNA水平和mRNA水平上0.25 mg/ml STS对MDVUL27基因和Meq基因的表达量差异变化。同时以广谱抗病毒药物阿昔洛韦(acyclovir,ACV)作为阳性对照,进一步评估STS的抗病毒效果。此外,通过Western blot试验研究STS在不同时间点作用后MDV gB蛋白表达量的变化。结果：1.实时荧光定量PCR结果显示STS可有效抑制MDV UL27基因的合成。DNA水平上,STS加入细胞后体系后的24 h、48 h、72 h、96 h STS组UL27基因拷贝数低于MDV病毒对照组,且统计学方法分析在72 h、96h时两者差异显著(P0.05): mRNA水平上,24 h时STS对UL27基因的表达无抑制作用；在STS加入细胞体系后的48 h、72 h、96 h时,STS组UL27基因拷贝数较MDV病毒对照组低,且在72 h和96 h时两者差异显著(P0.05)。2. Western blot试验结果显示STS对MDV gB蛋白的表达有抑制作用。药物加入细胞体系后的24 h、48h、72 h、96 h, STS组gB蛋白表达下调,且在24 h时,STS对gB蛋白表达的抑制作用较ACV强。3.实时荧光定量PCR结果显示,DNA水平上,STS加入细胞体系后的24 h、48 h,STS对Meq基因表达量无抑制作用；而在72 h、96 h时STS组Meq基因拷贝数降低,较病毒对照组差异显著(P0.05)。在转录水平(mRNA)上,STS加入细胞体系后的24 h、48 h对Meq的表达无抑制作用,Meq基因表达量与病毒对照组相比差异不显著(P0.05);而STS加入细胞体系后的72 h、96h对Meq的表达有抑制作用,Meq基因表达量较病毒对照组差异显著(P0.05)。结论：在STS抗MDV病毒的过程中,一方面通过调控MDV UL27和Meq基因的表达,影响了MDV的复制与增殖;另一方面STS通过阻断或妨碍病毒蛋白gB的表达发挥抗病毒作用。
【关键词】：马立克氏病病毒 丹参酮ⅡA磺酸钠 抗病毒机制 gB蛋白 U_L27 Meq
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：S855.3