丹参酮IIA磺酸钠抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）活性及其分子机制研究

【摘要】：目的：检测丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对PRRSV感染后的Marc-145细胞中自噬相关基因ATG5、Beclin1、ATG7 mRNA表达量和蛋白合成的影响。STS对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) N基因的表达量和N蛋白合成的影响,初步探讨STS抗病毒作用的机制。方法：采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测STS对Marc-145细胞中自噬相关基因ATG5、ATG7和Beclin1以及PRRSV N基因表达的影响。Western blot检测ATG5、ATG7和Beclin1和N蛋白合成的影响。同时通过间接免疫荧光试验研究STS对PRRSV N蛋白表达的影响,初步探讨STS的抗病毒机制。结果：1.实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和western blot结果显示在12hpi、24hpi、36hpi时STS能够抑制ATG5、ATG7和Beclin1 mRNA和蛋白的合成。且24hpi、36hpi时0.0625mg/mlSTS、0.03125mg/mlSTS抑制ATG5效果好于0.125mg/ml利巴韦林。36hpi时0.0625mg/mlSTS抑制Beclinl的效果好于0.125mg/ml利巴韦林。2.实时荧光定量PCR (qRT-PCR)结果显示在12hpi、24hpi时,0.03125mgSTS、 0.0625mg/mlSTS与0.125mg/ml利巴韦林都能显著抑制PRRSV N基因的表达。在36hpi时,0.0625mg/mlSTS和0.125mg/ml利巴韦林都能显著抑制PRRSV N基因的表达。3.间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot结果表明STS对PRRSV N蛋白的表达有抑制作用,且在36hpi时0.0625mg/ml STS、0.03125mg/ml STS抑制效果强于0.125mg/ml利巴韦林。结论：1.STS通过抑制自噬相关基因ATG5、ATG7和Beclin1的表达和蛋白的合成,说明STS能够影响自噬发生的早期阶段从而抑制PRRSV的复制。2.STS通过抑制PRRSV N基因表达和蛋白合成而起到抗病毒的作用。
【关键词】：猪繁殖与呼吸综合征病毒 丹参酮ⅡA磺酸钠 ATG5 ATG7 Beclin1 N蛋白 抗病毒活性
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：S855.3