| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 縮写表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·L-苏氨酸的理化性质及应用 | 第11-12页 |
| ·L-苏氨酸的理化性质 | 第11页 |
| ·L-苏氨酸的应用 | 第11-12页 |
| ·L-苏氨酸的生产方法及生产概况 | 第12-13页 |
| ·L-苏氨酸的生产方法 | 第12-13页 |
| ·L-苏氨酸生产概况 | 第13页 |
| ·国内外直接发酵法生产L-苏氨酸的研究进展 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌高密度发酵 | 第14-17页 |
| ·乙酸合成机制 | 第14页 |
| ·乙酸抑制菌体生长机制 | 第14-15页 |
| ·控制乙酸生产策略 | 第15-17页 |
| ·糖酵解途径的改造 | 第17-18页 |
| ·磷酸果糖激酶 | 第17页 |
| ·丙酮酸激酶 | 第17-18页 |
| ·转运系统 | 第18-20页 |
| ·葡萄糖转运系统 | 第18-19页 |
| ·L-苏氨酸转运系统 | 第19-20页 |
| ·立题背景及主要内容 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-34页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第23-26页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要溶液 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·抗生素 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-34页 |
| ·质粒的小剂量提取 | 第26页 |
| ·DNA纯化回收 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取 | 第27页 |
| ·大肠杆菌化学转化法感受态的制备及转化实验 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌电转化法感受态的制备及转化实验 | 第28-29页 |
| ·PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| ·质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·利用Red同源重组基因敲除方法 | 第31页 |
| ·胞内NADPH测定 | 第31页 |
| ·胞内L-苏氨酸的测定 | 第31-32页 |
| ·高效液相色谱法测定发酵液中的氨基酸含量 | 第32页 |
| ·高效液相色谱法测定发酵液中的有机酸含量 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌发酵L-苏氨酸的培养条件及分析测定方法 | 第33-34页 |
| 3 结果与讨论 | 第34-58页 |
| ·大肠杆菌THRD糖酵解途径的改造 | 第34-46页 |
| ·大肠杆菌THRD△pykF和THRD△pykA突变株的构建 | 第34-37页 |
| ·大肠杆菌E. coli THRD△pfkA和THRDApfkB突变株的构建 | 第37-39页 |
| ·pyk和pfk的敲除对L-苏氨酸发酵的影响 | 第39-40页 |
| ·pykF和pykA的敲除对E. coli THRD发酵L-苏氨酸的影响 | 第40-41页 |
| ·pfkA和pfkB的敲除对E. coli THRD发酵L-苏氨酸的影响 | 第41-42页 |
| ·pfkB和pyk双基因敲除对E. coli THRD发酵L-苏氨酸的影响 | 第42-43页 |
| ·pyk和pfk的敲除对NADPH生成的影响 | 第43-44页 |
| ·糖酵解途径的改造对生产菌发酵L-苏氨酸影响的讨论 | 第44-46页 |
| ·大肠杆菌TRFC糖转运系统的改造 | 第46-50页 |
| ·大肠杆菌TRFC△ptsG突变株的构建 | 第46-47页 |
| ·ptsG的敲除对L-苏氨酸发酵的影响 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌TRFC△ptsG的5 L发酵罐发酵验证 | 第48-49页 |
| ·ptsG的敲除对生产菌发酵L-苏氨酸产量影响的讨论 | 第49-50页 |
| ·大肠杆菌TRFC L-苏氨酸转运系统的改造 | 第50-58页 |
| ·大肠杆菌TRFC△sstT突变株的构建 | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌TRFCAsstT+pSTV28-rhtC的构建 | 第51-52页 |
| ·sstT的敲除对E. coli TRFC发酵L-苏氨酸的影响 | 第52-53页 |
| ·rhtC的过表达对E. coli TRFC发酵L-苏氨酸的影响 | 第53-54页 |
| ·转运系统的改造对胞内外L-苏氨酸积累的影响 | 第54-55页 |
| ·E. coli TRFC△sstT+pSTV28-rhtC的5 L发酵罐发酵验证 | 第55页 |
| ·转运系统改造对生产菌发酵L-苏氨酸产量影响的讨论 | 第55-56页 |
| ·总结 | 第56-58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 5 展望 | 第59-60页 |
| 6 参考文献 | 第60-66页 |
| 7 研究生期间所发表论文情况 | 第66-67页 |
| 8 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68页 |
