| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 英文縮略词表 | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-21页 |
| ·PPRV病原学 | 第16-18页 |
| ·病原特征 | 第16页 |
| ·生物学特性 | 第16页 |
| ·分子生物学研究 | 第16-18页 |
| ·流行病学 | 第18页 |
| ·小反刍兽疫诊断方法研究 | 第18-20页 |
| ·病毒分离培养 | 第18页 |
| ·琼脂凝胶免疫扩散 | 第18-19页 |
| ·对流免疫电泳 | 第19页 |
| ·反转录多聚酶链反应 | 第19页 |
| ·RT-LAMP检测方法 | 第19页 |
| ·病毒中和试验 | 第19页 |
| ·间接ELISA | 第19页 |
| ·夹心ELISA | 第19页 |
| ·竞争ELISA | 第19-20页 |
| ·PPR的预防 | 第20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株H蛋白的原核表达及鉴定 | 第21-35页 |
| 摘要 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21-25页 |
| ·病毒、载体及细胞 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·实验所用主要试剂及配制方法 | 第21-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-29页 |
| ·病毒扩增 | 第25页 |
| ·引物的设计 | 第25页 |
| ·提取病毒总RNA | 第25页 |
| ·RT-PCR扩增PPRV H基因及纯化 | 第25-26页 |
| ·PPRV H基因与pMD-19T载体连接、转化及阳性克隆鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组表达质粒构建和鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白可溶性分析 | 第29页 |
| ·重组蛋白纯化及定量 | 第29页 |
| ·重组蛋白Western blot鉴定 | 第29页 |
| ·实验结果与分析 | 第29-34页 |
| ·PPRV Nigeria75/1疫苗弱毒株扩增结果 | 第29-30页 |
| ·PCR鉴定PPRV H基因 | 第30页 |
| ·重组克隆质粒双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·双酶切鉴定重组表达质粒 | 第31页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·pET-22b-PPRV H重组蛋白可溶性分析 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白纯化及定量 | 第33页 |
| ·重组蛋白Western blot鉴定 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株H蛋白单克隆抗体制备及鉴定 | 第35-44页 |
| 摘要 | 第35页 |
| ·实验材料 | 第35-37页 |
| ·蛋白、实验动物与细胞 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第35页 |
| ·主要溶液配制 | 第35-37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·PPRV浓缩抗原制备 | 第37页 |
| ·小鼠免疫 | 第37页 |
| ·免疫小鼠血清抗体效价测定 | 第37页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的准备 | 第37-38页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的制备 | 第38页 |
| ·细胞融合 | 第38页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第38页 |
| ·阳性杂交瘤细胞亚克隆 | 第38页 |
| ·冻存与复苏杂交瘤细胞 | 第38-39页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第39页 |
| ·单克隆抗体腹水的大量制备 | 第39页 |
| ·单克隆抗体细胞染色体分析 | 第39页 |
| ·单克隆抗体的Western blot鉴定 | 第39页 |
| ·单克隆抗体间接免疫荧光实验 | 第39页 |
| ·单克隆抗体腹水效价测定 | 第39-40页 |
| ·单克隆抗体细胞传代稳定性检测 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-43页 |
| ·免疫小鼠血清抗体效价的测定 | 第40页 |
| ·单克隆细胞株的建立 | 第40页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第40页 |
| ·单克隆抗体染色体分析 | 第40-41页 |
| ·单克隆抗体的Western blot鉴定 | 第41-42页 |
| ·单克隆抗体的间接免疫荧光试验 | 第42页 |
| ·小鼠腹水效价测定 | 第42页 |
| ·杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性评价 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 小反刍兽疫病毒H蛋白在杆状病毒中的克隆表达及免疫原性究 | 第44-54页 |
| 摘要 | 第44页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·菌株、细胞株和质粒 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要溶液配制 | 第44-45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| ·目的基因的扩增 | 第45页 |
| ·重组供体质粒的构建及鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组穿梭质粒的构建 | 第46页 |
| ·重组穿梭质粒的鉴定 | 第46页 |
| ·重组穿梭质粒转染Sf21细胞 | 第46页 |
| ·重组杆状病毒扩增 | 第46-47页 |
| ·Western blot鉴定重组蛋白的抗原性 | 第47页 |
| ·间接免疫荧光鉴定重组蛋白的抗原性 | 第47页 |
| ·实验动物免疫 | 第47页 |
| ·抗体效价测定 | 第47-48页 |
| ·血清中和抗体检测 | 第48页 |
| ·淋巴细胞增殖实验 | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-53页 |
| ·小反刍兽疫病毒H基因的扩增 | 第48-49页 |
| ·含目的基因的重组Bacmid-PPRV-H质粒的筛选与鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组质粒转染Sf21后的细胞形态 | 第50页 |
| ·重组蛋白的Western blot鉴定结果 | 第50-51页 |
| ·IFA | 第51-52页 |
| ·抗体效价测定 | 第52页 |
| ·血清中和抗体效价 | 第52页 |
| ·淋巴细胞增殖反应 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 第五章 基于PPRV H重组蛋白间接ELISA方法的建立 | 第54-60页 |
| 摘要 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·抗原及血清 | 第54页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第54页 |
| ·主要仪器及主要溶液配制 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-55页 |
| ·pET-22b-PPRV H重组蛋白间接ELISA检测方法的优化 | 第54-55页 |
| ·批内、批间重复性实验 | 第55页 |
| ·间接ELISA方法特异性评价 | 第55页 |
| ·临床血清样本检测(符合率) | 第55页 |
| ·实验结果 | 第55-59页 |
| ·pET-22b-PPRV H蛋白间接ELISA方法优化结果 | 第55-58页 |
| ·间接ELISA操作程序 | 第58页 |
| ·重复性评价 | 第58页 |
| ·间接ELISA方法特异性评价 | 第58-59页 |
| ·临床血清样本检测 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 第六章 全文总结 | 第60-61页 |
| ·PPRV Nigeria75/1株H蛋白的原核表达及鉴定 | 第60页 |
| ·PPRV Nigeria75/1株H蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第60页 |
| ·PPRV Nigeria75/1株H基因在杆状病毒中的表达及其免疫原性的研究 | 第60页 |
| ·基于PPRV H重组蛋白间接ELISA检测方法的建立 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简历 | 第67页 |
