铜绿假单胞菌在巨噬细胞内应激反应后的磷酸化蛋白质组研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 缩略用语表 | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.铜绿假单胞菌 | 第9页 |
| 2.巨噬细胞的杀菌机制 | 第9-10页 |
| 3.细菌应激反应 | 第10-11页 |
| 4.细菌蛋白质的磷酸化修饰 | 第11-12页 |
| 5.铜绿假单胞菌磷酸化蛋白 | 第12-13页 |
| 6.固定化金属亲和层析 | 第13-14页 |
| 7.细菌磷酸化蛋白质组学研究 | 第14-15页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第15-30页 |
| 1. 材料 | 第15-18页 |
| ·实验菌株 | 第15页 |
| ·实验小鼠 | 第15页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第15-18页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| ·主要溶液配制 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| 2. 实验方法 | 第18-21页 |
| ·铜绿假单胞菌培养 | 第18页 |
| ·小鼠巨噬细胞准备及吞噬细菌实验 | 第18页 |
| ·样品制备 | 第18-19页 |
| ·菌煮沸 | 第18页 |
| ·超声破碎 | 第18-19页 |
| ·还原烷基化处理 | 第19页 |
| ·蛋白定量 | 第19页 |
| ·胰酶酶切 | 第19页 |
| ·C18柱流动相 A B 液过滤除气泡 | 第19页 |
| ·HPLC 脱盐 | 第19页 |
| ·强阳离子交换 | 第19-20页 |
| ·固定化金属亲和层析 | 第20页 |
| ·LC-MS | 第20-21页 |
| ·数据库搜索数据分析 | 第21页 |
| ·Western blot 实验 | 第21页 |
| 3.实验结果 | 第21-28页 |
| ·小鼠巨噬细胞吞噬铜绿假单胞菌 | 第21-22页 |
| ·HPLC 脱盐 | 第22页 |
| ·强阳离子交换 | 第22-23页 |
| ·LC-MS 鉴定应激铜绿假单胞菌磷酸化肽 | 第23-26页 |
| ·LC-MS 鉴定得到的磷酸化蛋白分析 | 第26-27页 |
| ·免疫印迹法验证铜绿假单胞菌磷酸化蛋白 | 第27-28页 |
| 4.讨论 | 第28-30页 |
| 参考文献 | 第30-34页 |
| 致谢 | 第34页 |
