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黄瓜花叶病毒2b蛋白与拟南芥核输入蛋白alpha的互作研究

摘要第1-10页
Abstract第10-14页
第一章 文献综述第14-25页
   ·黄瓜花叶病毒第14-21页
     ·黄瓜花叶病毒病毒结构及基因组功能第14-16页
     ·黄瓜花叶病毒2b蛋白功能第16-19页
     ·黄瓜花叶病毒2b蛋白的亚细胞定位第19-21页
   ·拟南芥核输入蛋白研究进展第21-24页
     ·拟南芥核输入蛋白第21-22页
     ·核输入蛋白介导的核质转运分子机制及调控方式第22-23页
     ·拟南芥核输入蛋白与植物病毒蛋白的互作第23-24页
   ·本研究的目的与意义第24-25页
     ·研究目的和意义第24页
     ·研究内容第24-25页
第二章 拟南芥核输入蛋白alpha基因的克隆第25-37页
   ·材料和方法第25-32页
     ·植物材料第25页
     ·酶与试剂第25-26页
     ·拟南芥核输入蛋白alpha基因的克隆第26-32页
   ·结果与分析第32-35页
     ·拟南芥总RNA提取及mRNA纯化第32-33页
     ·拟南芥importinalpha基因扩增结果第33页
     ·克隆和测序结果第33-35页
   ·小结与讨论第35-37页
第三章 CMV2b蛋白与拟南芥核输入蛋白alpha的互作检测第37-55页
     ·材料和方法第37-44页
     ·细菌、质粒和植物第37页
     ·酶与试剂第37-38页
     ·诱饵蛋白pGBKT7-Fny2b/pGBKT7-LS2b质粒构建第38-39页
     ·酵母菌株保存第39页
     ·酵母双杂交操作第39-40页
     ·诱饵载体pGBKT7-2b毒性及自激活检测第40-41页
     ·酵母双杂交互作分析第41页
     ·BiFC克隆构建第41-42页
     ·阳性质粒转化农杆菌第42-43页
     ·农杆菌侵润接种第43-44页
   ·结果与分析第44-53页
     ·酵母双杂交实验结果第44-48页
     ·荧光双分子互补实验检测结果第48-53页
   ·小结与讨论第53-55页
第四章 2b蛋白核定位信号在拟南芥核输入蛋白alpha与2b互作中的作用第55-62页
     ·材料和方法第55-57页
     ·菌体、植物材料第55页
     ·酶与试剂第55页
     ·Fny2b蛋白核定位信号突变体构建第55-57页
     ·阳性质粒转化农杆菌及农杆菌共注射接种第57页
   ·结果与分析第57-60页
     ·Fny2b蛋白核定位信号突变体overlappingPCR结果第57-58页
     ·Fny2b蛋白核定位信号突变体克隆和测序的结果第58-59页
     ·荧光双分子互补实验结果第59-60页
   ·小结与讨论第60-62页
第五章 IMPa2的瞬时表达增强CMV2b细胞核定位和致病性第62-68页
   ·材料和方法第62-63页
     ·植物材料第62页
     ·酶与试剂第62页
     ·农杆菌瞬时表达及GFP荧光观察第62-63页
     ·拟南芥接种Fny-CMV2bNLS病毒第63页
   ·结果与分析第63-66页
     ·IMPa2、IMPa3和IMPa6瞬时表达对Fny2b蛋白核定位的影响第63-64页
     ·IMPa2过表达对Fny2b介导致病性的影响第64-65页
     ·拟南芥突变体接种Fny-CMV2bNLS病毒症状差异第65-66页
   ·小结与讨论第66-68页
第六章 拟南芥核输入蛋白的亚细胞定位和组织特异性研究第68-76页
   ·材料和方法第68-71页
     ·植物材料第68页
     ·酶与试剂第68页
     ·亚细胞定位克隆构建第68-69页
     ·组织特异性克隆构建第69-70页
     ·亚细胞定位阳性克隆质粒及组织特异性阳性克隆质粒转化农杆菌第70页
     ·GFP-IMPa融合蛋白的瞬时表达和亚细胞定位观察第70页
     ·IMPa启动子转基因拟南芥突变体第70-71页
   ·结果与分析第71-75页
     ·GFP融合的IMPa蛋白双元表达载体的构建第71-73页
     ·亚细胞定位荧光检测结果第73-74页
     ·IMPa启动子组织特异性克隆构建第74-75页
   ·小结与讨论62第75-76页
总结第76-78页
参考文献第78-83页
致谢第83页

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