| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 缩略词 | 第16-17页 |
| 文献综述 | 第17-25页 |
| 1 猪支原体肺炎概况及病原特征 | 第17-18页 |
| 2 猪肺炎支原体主要免疫原蛋白 | 第18-20页 |
| ·细胞质蛋白 | 第18页 |
| ·膜蛋白 | 第18-19页 |
| ·黏附因子 | 第19-20页 |
| ·核苷酸还原酶 | 第20页 |
| 3 猪支原体肺炎疫苗的研究 | 第20-22页 |
| ·弱毒和灭活疫苗 | 第20-21页 |
| ·基因工程疫苗 | 第21-22页 |
| 4 抗猪肺炎支原体单克隆抗体的研究 | 第22页 |
| ·抗p36蛋白的单抗 | 第22页 |
| ·抗p46蛋白的单抗 | 第22页 |
| ·抗p65蛋白的单抗 | 第22页 |
| ·抗p74蛋白的单抗 | 第22页 |
| ·抗p97蛋白的单抗 | 第22页 |
| ·抗猪支原体的单抗 | 第22页 |
| 5 猪肺炎支原体的检测方法 | 第22-25页 |
| ·临床诊断 | 第22-23页 |
| ·病原学诊断 | 第23-24页 |
| ·血清学检测方法 | 第24-25页 |
| 第一部分 猪支原体肺炎新型疫苗的研制 | 第25-51页 |
| 一、猪支原体肺炎亚单位疫苗的研制 | 第25-38页 |
| 前言 | 第25页 |
| 1 实验材料 | 第25-28页 |
| ·菌种和质粒 | 第25-26页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第26页 |
| ·实验器材 | 第26-27页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·培养基及试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-31页 |
| ·p46和p65基因的克隆 | 第28-29页 |
| ·目的基因的定点突变 | 第29页 |
| ·p46和p65蛋白的表达 | 第29页 |
| ·p46和p65蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| ·疫苗的制备 | 第30页 |
| ·小鼠的免疫试验 | 第30页 |
| ·脾淋巴细胞的免疫检测 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-36页 |
| ·p46和p65片段的扩增 | 第31页 |
| ·p46和p65定点突变的鉴定 | 第31-33页 |
| ·p46和p65重组蛋白的表达 | 第33-34页 |
| ·p46和p65重组蛋白的纯化 | 第34页 |
| ·血清MP Ab、IFN-γ和IL-4的检测结果 | 第34-36页 |
| ·肺的免疫检测结果 | 第36页 |
| ·脾淋巴细胞的免疫检测结果 | 第36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 二、猪支原体肺炎基因工程活疫苗的研制 | 第38-51页 |
| 前言 | 第38页 |
| 1 实验材料 | 第38-39页 |
| ·质粒和菌株 | 第38-39页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第39页 |
| ·实验器材 | 第39页 |
| ·试剂的配制 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-43页 |
| ·p46和p65基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第40页 |
| ·电转感受态细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·沙门氏菌的电转化 | 第41页 |
| ·重组菌株的构建与鉴定 | 第41页 |
| ·外源蛋白的分泌表达 | 第41页 |
| ·Western-blot | 第41-42页 |
| ·重组菌株的生化特性 | 第42页 |
| ·重组菌株的生长特性 | 第42页 |
| ·重组菌株的遗传稳定性 | 第42页 |
| ·小鼠的免疫试验 | 第42-43页 |
| ·脾淋巴细胞的免疫检测 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-49页 |
| ·重组质粒的构建 | 第43-44页 |
| ·重组菌株的构建与鉴定 | 第44页 |
| ·外源蛋白的分泌表达 | 第44-45页 |
| ·重组菌株的生化特性 | 第45页 |
| ·重组菌株的生长特性 | 第45-46页 |
| ·重组菌株的遗传稳定性 | 第46页 |
| ·清MPAb、IFN-γ和IL-4的检测结果 | 第46-48页 |
| ·肺的免疫检测结果 | 第48页 |
| ·脾淋巴细胞的免疫检测结果 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第二部分 抗猪肺炎支原体P36蛋白单克隆抗体的制备与应用 | 第51-63页 |
| 前言 | 第51页 |
| 1 实验材料 | 第51-53页 |
| ·细胞和样品 | 第51页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第51-52页 |
| ·实验器材 | 第52页 |
| ·培养基及试剂的配制 | 第52-53页 |
| 2 实验方法 | 第53-57页 |
| ·小鼠免疫 | 第53页 |
| ·细胞融合 | 第53-54页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第54-55页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆 | 第55页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第55页 |
| ·单克隆抗体的生产 | 第55页 |
| ·单克隆抗体的Western-blot分析 | 第55页 |
| ·单克隆抗体效价的测定 | 第55-56页 |
| ·单克隆抗体Ig型的测定 | 第56页 |
| ·腹水中单抗的纯化 | 第56页 |
| ·石蜡切片的制作 | 第56-57页 |
| ·免疫组化(SABC染色法) | 第57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-61页 |
| ·单克隆抗体的Western-blot结果 | 第57-58页 |
| ·单克隆抗体的效价 | 第58页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第58-59页 |
| ·腹水中单抗的纯化 | 第59页 |
| ·一抗的最佳稀释倍数 | 第59页 |
| ·免疫组化的结果 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| ·猪支原体肺炎亚单位疫苗的研制 | 第63页 |
| ·猪支原体肺炎基因工程活疫苗的研制 | 第63页 |
| ·抗猪肺炎支原体p36蛋白单克隆抗体的制备与应用 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71页 |