| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-15页 |
| ·原核表达系统概述 | 第9-10页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第9页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第9-10页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态形成机制 | 第10-11页 |
| ·枯草芽孢杆菌转化方法概述 | 第11-12页 |
| ·化学转化法 | 第11页 |
| ·电转化法 | 第11-12页 |
| ·原生质体转化法 | 第12页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统中表达载体概述 | 第12页 |
| ·穿梭载体的研究现状 | 第12页 |
| ·本论文的研究内容及意义 | 第12-15页 |
| ·研究内容 | 第12-13页 |
| ·研究意义 | 第13-15页 |
| 2 材料和方法 | 第15-38页 |
| ·材料 | 第15-20页 |
| ·菌种及质粒 | 第15页 |
| ·工具酶及相关试剂 | 第15-17页 |
| ·主要仪器和设备 | 第17页 |
| ·培养基及培养条件 | 第17-18页 |
| ·主要溶液 | 第18-20页 |
| ·方法 | 第20-38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化方法 | 第20-21页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化方法 | 第21-22页 |
| ·SDS-碱抽提法提取质粒方法 | 第22页 |
| ·嗜碱芽孢杆菌基因组提取方法 | 第22-23页 |
| ·pBE2a的构建 | 第23-24页 |
| ·pBE2R的构建 | 第24-26页 |
| ·pBE2R拷贝数的测定 | 第26-27页 |
| ·pBE2R稳定性测定 | 第27-28页 |
| ·pBE2R-apr的构建及其在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第28-29页 |
| ·有机溶剂沉淀胞外蛋白方法 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE | 第30-32页 |
| ·福林酚法测定碱性蛋白酶酶活的方法 | 第32-34页 |
| ·利用pBE2R构建碱性蛋白酶突变库 | 第34-36页 |
| ·利用pBE2R在枯草芽孢杆菌中表达中温α-淀粉酶 | 第36-38页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-67页 |
| ·pBE2a的构建 | 第38-40页 |
| ·P43强启动子的获得 | 第38-39页 |
| ·pBE2连接大片段的获得 | 第39页 |
| ·pBE2a的构建 | 第39-40页 |
| ·pBE2R的构建 | 第40-42页 |
| ·sp的扩增 | 第40-41页 |
| ·pBE2R的构建 | 第41-42页 |
| ·pBE2R拷贝数测定 | 第42-48页 |
| ·DH5α/WB600/pBE2R内参基因标准质粒的建立 | 第42-43页 |
| ·DH5α内参基因拷贝数的测定 | 第43-44页 |
| ·WB600内参基因拷贝数的测定 | 第44-46页 |
| ·pBE2R内参基因拷贝数的测定 | 第46-48页 |
| ·pBE2R稳定性检测 | 第48-49页 |
| ·pBE2R在大肠杆菌中的稳定性 | 第48页 |
| ·pBE2R在枯草芽孢杆菌中的稳定性 | 第48-49页 |
| ·pBE2R-apr的构建及其在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第49-50页 |
| ·pBE2R-apr的构建 | 第49-50页 |
| ·pBE2R-apr在枯草芽孢杆菌的表达 | 第50页 |
| ·与碱性蛋白酶前肽胞外切割密切相关的氨基酸序列的预测 | 第50-61页 |
| ·插入突变体pBE2a-sp'的构建 | 第51-53页 |
| ·碱性蛋白酶利用pBE2a-sp'在枯草芽孢杆菌的表达 | 第53-55页 |
| ·不同插入突变对碱性蛋白酶活性的影响 | 第55-61页 |
| ·pBE2R的应用 | 第61-67页 |
| ·利用pBE2R构建碱性蛋白酶突变库 | 第61-64页 |
| ·中温α-淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第64-67页 |
| 4 结论 | 第67-69页 |
| 5 展望 | 第69-70页 |
| 6 参考文献 | 第70-76页 |
| 7 论文发表情况 | 第76-77页 |
| 8 致谢 | 第77页 |
