| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-34页 |
| ·高等植物细胞壁概述 | 第16-22页 |
| ·高等植物细胞壁组成及分类 | 第16-18页 |
| ·纤维素 | 第18-20页 |
| ·木质素 | 第20-22页 |
| ·棉花纤维发育 | 第22-25页 |
| ·棉花纤维发育模式 | 第22-23页 |
| ·纤维发育与激素之间的关系 | 第23页 |
| ·棉纤维发育的分子机制研究 | 第23-25页 |
| ·高等植物次生细胞壁研究进展 | 第25-28页 |
| ·拟南芥木质部分化的调控研究 | 第25-27页 |
| ·棉纤维次生发育的调控研究 | 第27-28页 |
| ·植物KNOX转录因子研究进展 | 第28-33页 |
| ·KNOX转录因子的发现与分类 | 第28-29页 |
| ·KNOX基因的表达调控 | 第29-32页 |
| ·KNOX蛋白结构及其功能 | 第32-33页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第33-34页 |
| 第二章 GhKNL1基因克隆鉴定及表达活性分析 | 第34-51页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·GhKNL1基因的cDNA | 第34页 |
| ·菌种和载体 | 第34页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第34页 |
| ·常用存储液和缓冲液 | 第34页 |
| ·DNA抽提所用试剂 | 第34-35页 |
| ·RNA抽提所用试剂 | 第35页 |
| ·GUS染液的配方 | 第35页 |
| ·实验器材 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-44页 |
| ·GhKNL1基因及其编码蛋白序列分析 | 第36页 |
| ·感受态的制备及转化 | 第36-37页 |
| ·植物材料的准备 | 第37-38页 |
| ·植物基因组DNA提取 | 第38-39页 |
| ·棉花各组织总RNA抽提 | 第39-40页 |
| ·棉花总RNA的纯化 | 第40-41页 |
| ·RNA反转录 | 第41页 |
| ·实时定量PCR分析 | 第41-43页 |
| ·启动子分离以及测序 | 第43-44页 |
| ·GUS染色及观察 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-49页 |
| ·GhKNL1基因分离鉴定 | 第44-45页 |
| ·GhKNL1蛋白系统进化分析 | 第45-46页 |
| ·GhKNL1基因在棉花各个组织/器官中的差异表达 | 第46页 |
| ·激素处理对GhKNL1基因表达的影响 | 第46-47页 |
| ·GhKNL1基因启动子的表达模式分析 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·GhKNL1基因属于第Ⅱ类KNOX家族成员 | 第49页 |
| ·GhKNL1基因在纤维进入次生壁发育时期表达量较高 | 第49-50页 |
| ·GhKNL1启动子在拟南芥维管系统中有较高活性 | 第50-51页 |
| 第三章 GhKNL1蛋白相互作用及亚细胞定位分析 | 第51-63页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·菌种和质粒 | 第51页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第51页 |
| ·化学试剂 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-57页 |
| ·DNA及蛋白序列分析 | 第52页 |
| ·GhKNL1和GhOFP4基因的分离以及测序 | 第52-53页 |
| ·GhKNL1：：eGFP和GhOFP4：：eGFP载体的构建及农杆菌转化 | 第53页 |
| ·农杆菌介导的植物转化 | 第53-54页 |
| ·转基因拟南芥阳性苗的鉴定 | 第54页 |
| ·实时定量PCR分析 | 第54页 |
| ·酵母载体构建及酵母转化 | 第54-56页 |
| ·诱饵蛋白自激活及毒性检测 | 第56页 |
| ·蛋白相互作用分析 | 第56-57页 |
| ·实验结果 | 第57-61页 |
| ·GhKNL1蛋白自激活检测及同源二聚体分析 | 第57-58页 |
| ·GhKNL1蛋白相互作用分析 | 第58-59页 |
| ·GhKNL1和GhOFP4亚细胞定位及组织表达分析 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·KNOXⅡ类GhKNL1没有转录激活活性 | 第61-62页 |
| ·GhKNL1蛋白可形成同源或异源二聚体 | 第62-63页 |
| 第四章 GhKNL1在拟南芥次生壁发育过程中的功能 | 第63-80页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·植物材料 | 第63页 |
| ·菌种和载体 | 第63页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第63页 |
| ·化学试剂及缓冲液 | 第63页 |
| ·实验器材 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-68页 |
| ·GhKNL1过量表达以及显性抑制载体的构建 | 第64页 |
| ·拟南芥的培养和遗传转化 | 第64页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取 | 第64页 |
| ·拟南芥RNA的提取、纯化及逆转录 | 第64-65页 |
| ·半定量PCR检测细胞壁发育相关基因的表达 | 第65页 |
| ·拟南芥徒手切片的制作 | 第65-66页 |
| ·树脂包埋与半薄切片制备 | 第66页 |
| ·超薄切片制作和透视电镜观察 | 第66页 |
| ·拟南芥种子钌红染色 | 第66页 |
| ·细胞壁组分分析(糖的衍生化-GC分析) | 第66-67页 |
| ·GhKNL1同源的拟南芥T-DNA突变体knat7鉴定及回补 | 第67页 |
| ·酵母双杂交分析鉴定相互作用蛋白 | 第67-68页 |
| ·结果 | 第68-77页 |
| ·GhKNL1过量表达和显性抑制载体的构建及拟南芥转化 | 第68-69页 |
| ·转基因拟南芥表型分析 | 第69-73页 |
| ·次生壁合成相关基因的表达分析 | 第73-74页 |
| ·单糖组分分析及纤维素含量测定 | 第74页 |
| ·knat7突变体(SALK_110899)的鉴定及功能回补 | 第74-77页 |
| ·酵母双杂交分析GhKNL1与AtOFP1、AtOFP4和AtMYB75相互作用 | 第77页 |
| ·讨论 | 第77-80页 |
| ·植物转录因子显性抑制在基因功能上的应用 | 第77-78页 |
| ·GhKNL1在调控植物次生壁发育的功能上具有一定的保守性 | 第78-80页 |
| 第五章 GhKNL1在棉纤维发育中的功能 | 第80-95页 |
| ·实验材料 | 第80页 |
| ·植物材料 | 第80页 |
| ·菌种和载体 | 第80页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第80页 |
| ·常用存储液和缓冲液 | 第80页 |
| ·实验器材 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80-83页 |
| ·棉花显性抑制载体和RNAi载体的构建 | 第80-81页 |
| ·农杆菌感受态的制备及转化 | 第81页 |
| ·转基因棉花遗传转化 | 第81页 |
| ·DNA和RNA的提取、逆转录及实时定量RT-PCR | 第81-82页 |
| ·棉纤维半薄切片的制备 | 第82页 |
| ·TFU棉纤维产量的测定方法 | 第82-83页 |
| ·结果 | 第83-93页 |
| ·GhKNL1显性抑制和RNAi载体的构建以及棉花遗传转化 | 第83-84页 |
| ·显性抑制转基因棉花的鉴定 | 第84-86页 |
| ·表型分析 | 第86-88页 |
| ·半薄切片分析纤维发育 | 第88-90页 |
| ·纤维产量测定 | 第90-91页 |
| ·转基因棉花中与纤维发育相关基因的表达水平分析 | 第91-93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| ·GhKNL1显性抑制转基因棉花的棉纤维生长受到抑制 | 第93页 |
| ·纤维发育相关基因的表达受到影响 | 第93-95页 |
| 第六章 GhAGP31在植物冷胁迫应答中的功能 | 第95-113页 |
| ·引言 | 第95-96页 |
| ·实验材料 | 第96页 |
| ·植物材料 | 第96页 |
| ·菌种和载体 | 第96页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第96页 |
| ·常用存储液和缓冲液 | 第96页 |
| ·实验器材 | 第96页 |
| ·实验方法 | 第96-99页 |
| ·植物材料处理 | 第96-97页 |
| ·亚细胞定位载体构建及棉花遗传转化 | 第97页 |
| ·启动子分离鉴定 | 第97-98页 |
| ·过量表达载体构建 | 第98页 |
| ·酵母转化以及抗冷性分析 | 第98页 |
| ·拟南芥转化以及转基因植株鉴定 | 第98-99页 |
| ·转基因拟南芥抗冷性分析 | 第99页 |
| ·抗冷性相关基因的表达分析 | 第99页 |
| ·结果 | 第99-111页 |
| ·GhAGP31基因分离鉴定 | 第99-101页 |
| ·GhAGP31蛋白的亚细胞定位 | 第101-102页 |
| ·GhAGP31基因组织表达分析 | 第102-104页 |
| ·GhAGP31基因表达受冷胁迫诱导 | 第104-105页 |
| ·GhAGP31启动子活性分析 | 第105-107页 |
| ·过量表达GhAGP31基因增强了酵母细胞的冷耐受性 | 第107-109页 |
| ·GhAGP31过量表达的转基因拟南芥增强了植株冷耐受性 | 第109-110页 |
| ·转基因拟南芥植株中冷胁迫相关基因的表达改变 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-113页 |
| 结论 | 第113-114页 |
| 本论文的主要创新点 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-131页 |
| 附录 縮写词表 | 第131-133页 |
| 攻读学位期间撰写和发表的学术论文 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
