| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-37页 |
| 1 茶氨酸及其代谢相关酶的研究 | 第12-20页 |
| ·茶氨酸的研究现状 | 第12-15页 |
| ·茶氨酸的生理功能 | 第12-13页 |
| ·茶氨酸的理化性质 | 第13-14页 |
| ·茶氨酸在茶树体内的分布及作用 | 第14页 |
| ·茶树体内茶氨酸的代谢 | 第14-15页 |
| ·茶氨酸代谢与调控的研究 | 第15-20页 |
| ·茶氨酸合成酶 | 第15-16页 |
| ·茶氨酸水解酶 | 第16页 |
| ·茶树体内茶氨酸合成与转运的位点 | 第16-17页 |
| ·其它合成茶氨酸的酶 | 第17-18页 |
| ·茶氨酸的调控因素 | 第18-20页 |
| 2 谷氨酰胺合成酶的研究现状 | 第20-26页 |
| ·植物谷氨酰胺合成酶的种类与分布 | 第20-22页 |
| ·植物谷氨酰胺合成酶的分子生物学研究 | 第22-23页 |
| ·植物谷氨酰胺合成酶基因的表达与调控 | 第23-24页 |
| ·启动子特异性 | 第23页 |
| ·转录水平调控 | 第23-24页 |
| ·翻译水平的调控 | 第24页 |
| ·谷氨酰胺合成酶转基因植物功能性研究 | 第24-26页 |
| ·转谷氨酰胺合成酶基因对提高植物N素利用与促进生长的影响 | 第24-26页 |
| ·转谷氨酰胺合成酶基因改变作物耐胁迫能力 | 第26页 |
| 3 高等植物氮营养代谢的研究 | 第26-35页 |
| ·氮素在植物中的功能 | 第27-28页 |
| ·植物对氮素的吸收与同化 | 第28-32页 |
| ·氮素的吸收 | 第28-32页 |
| ·植物体内一氧化氮的信号传导作用 | 第32-35页 |
| ·NO的产生 | 第32-33页 |
| ·NO在植物代谢中的信号调节 | 第33-35页 |
| ·NO对基因表达的调控 | 第35页 |
| 4 研究目的意义及内容 | 第35-37页 |
| 第二章 茶树TS基因的CDNA克隆及原核表达 | 第37-56页 |
| 1.引言 | 第37页 |
| 2.材料与试剂 | 第37-40页 |
| ·试验材料 | 第37页 |
| ·主要实验仪器 | 第37-38页 |
| ·主要实验试剂 | 第38页 |
| ·本章主要实验试剂配方 | 第38-40页 |
| 3.实验方法 | 第40-49页 |
| ·茶树叶片总RNA的提取与鉴定 | 第40-41页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第41-42页 |
| ·cDNA特异片段的RT-PCR扩增 | 第42页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第42-43页 |
| ·E. coli DH5α感受态的制备 | 第43页 |
| ·PCR产物的连接转化 | 第43-44页 |
| ·阳性克隆的鉴定和测序 | 第44-45页 |
| ·pEASY-TS/GS原核表达载体的构建 | 第45-47页 |
| ·pEASY-TS/GS的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·pMAL-TS/GS原核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 4.结果与分析 | 第49-53页 |
| ·茶树叶片总RNA提取质量及cDNA一链反转结果的电泳检测 | 第49-50页 |
| ·pEASY-TS/GS表达载体的构建 | 第50-52页 |
| ·TS/GS ORF的扩增 | 第50页 |
| ·pEASY-TS/GS 连接产物的PCR检测 | 第50-51页 |
| ·pEASY-TS/GS质粒DNA的双酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·pEASY-TS/GS的原核表达 | 第52-53页 |
| ·pMAL-TS/GS的原核表达 | 第53页 |
| 5.讨论 | 第53-56页 |
| 第三章 茶树TS的酶活力鉴定 | 第56-63页 |
| 1.引言 | 第56页 |
| 2.材料与方法 | 第56-59页 |
| ·主要仪器设备 | 第56页 |
| ·样品与试剂 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-59页 |
| ·pMAL-TS直接进行酶促反应 | 第56-57页 |
| ·pMAL-TS诱导蛋白上清液进行酶促反应 | 第57页 |
| ·pMAL-TS诱导蛋白纯化后进行酶促反应 | 第57-58页 |
| ·pMALGS酶活性验证 | 第58页 |
| ·酶促反应测定的HPLC 分析条件 | 第58-59页 |
| ·酶促反应结果的质谱验证 | 第59页 |
| 3.结果与分析 | 第59-62页 |
| ·pMAL-TS诱导蛋白酶促反应结果检测 | 第59-61页 |
| ·pMALGS诱导蛋白酶促反应结果检测 | 第61-62页 |
| 4. 讨论与小结 | 第62-63页 |
| 第四章 茶树TS基因在拟南芥中的表达 | 第63-72页 |
| 1.引言 | 第63页 |
| 2.材料与试剂 | 第63-64页 |
| ·试验材料 | 第63-64页 |
| ·植物材料 | 第63-64页 |
| ·菌种和载体 | 第64页 |
| ·实验试剂 | 第64页 |
| 3.实验方法 | 第64-67页 |
| ·pGREEN35S-TS真核表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第65页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第65页 |
| ·农杆菌介导的花序转染法转化拟南芥 | 第65-66页 |
| ·植物的生长 | 第65页 |
| ·渗透操作 | 第65-66页 |
| ·转化子的筛选 | 第66页 |
| ·转基因植株的检测 | 第66-67页 |
| ·转化子的遗传分析 | 第66页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第66-67页 |
| ·转基因植株的激光共聚焦显微镜观察 | 第67页 |
| 4.结果与分析 | 第67-70页 |
| ·pGREEN-35S-TS载体构建 | 第67页 |
| ·农杆菌转化检测 | 第67-68页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第68-69页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第69页 |
| ·报告基因GFP的表达 | 第69-70页 |
| 5 讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 茶氨酸合成酶生物信息学分析 | 第72-79页 |
| 1.引言 | 第72页 |
| 2.材料与方法 | 第72-73页 |
| ·研究材料 | 第72页 |
| ·TS与GS蛋白基本理化性质分析 | 第72页 |
| ·TS与GS蛋白亚细胞定位与功能分析 | 第72页 |
| ·TS与GS蛋白结构域分析 | 第72-73页 |
| ·TS与GS蛋白序列系统进化树构建 | 第73页 |
| 3.结果与分析 | 第73-78页 |
| ·TS与GS蛋白基本理化性质分析 | 第73页 |
| ·TS与GS蛋白蛋白亚细胞定位与功能分析预测 | 第73-74页 |
| ·TS与GS蛋白结构分析 | 第74-76页 |
| ·TS与GS蛋白二级结构分析预测 | 第74-75页 |
| ·TS与GS蛋白三级结构分析预测 | 第75-76页 |
| ·GS蛋白系统进化树构建 | 第76-78页 |
| 4. 小结 | 第78-79页 |
| 第六章 茶树TS多克隆抗体制备 | 第79-87页 |
| 1.材料与方法 | 第79-83页 |
| ·材料与试剂 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-83页 |
| ·E.coli表达pEASY-TS重组蛋白包涵体的纯化 | 第79-81页 |
| ·兔抗TS抗血清的制备及纯化 | 第81页 |
| ·茶树组织总蛋白粗提液的制备 | 第81页 |
| ·Western blot检测TS抗体特异性 | 第81-83页 |
| 2.结果与分析 | 第83-85页 |
| ·pEASY-TS的纯化 | 第83-84页 |
| ·TS兔多克隆抗体的特异性鉴定 | 第84-85页 |
| 3.讨论与小结 | 第85-87页 |
| 第七章 NO对茶氨酸代谢的信号调控 | 第87-94页 |
| 1.引言 | 第87页 |
| 2.材料与方法 | 第87-89页 |
| ·植物材料 | 第87页 |
| ·实验试剂与仪器 | 第87-88页 |
| ·样品预处理 | 第88页 |
| ·氨基酸含量测定的HPLC 分析条件 | 第88页 |
| ·儿茶素类和嘌呤碱含量测定的HPLC 分析条件 | 第88页 |
| ·茶籽苗各部位蛋白提取及Western Blotting检测 | 第88-89页 |
| 3.结果与分析 | 第89-92页 |
| ·不同浓度一氧化氮处理对茶苗茶氨酸代谢的影响 | 第89-90页 |
| ·不同浓度一氧化氮处理对茶苗茶氨酸和儿茶素代谢的影响 | 第90-91页 |
| ·不同抑制剂处理对茶苗茶氨酸代谢的影响 | 第91-92页 |
| 4. 讨论与小结 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-109页 |
| 附录A 多序列比对图 | 第109-117页 |
| 附录B NO处理茶幼苗中氨基酸含量测定结果 | 第117-120页 |
| 附录C 缩略词表 | 第120-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 作者简介 | 第124-125页 |
| 在学期间发表的论著及科研成果 | 第125页 |
