| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-20页 |
| ·谷胱甘肽 S-转移酶 | 第13-15页 |
| ·谷胱甘肽 S-转移酶的分型与基本结构 | 第13-14页 |
| ·谷胱甘肽 S-转移酶的功能 | 第14-15页 |
| ·谷胱甘肽 S-转移酶的研究意义 | 第15页 |
| ·钙周期素结合蛋白 | 第15-17页 |
| ·钙周期素结合蛋白的定位与功能 | 第15-16页 |
| ·钙周期素结合蛋白与目标蛋白的相互作用 | 第16-17页 |
| ·钙周期素结合蛋白的研究意义 | 第17页 |
| ·烟碱型乙酰胆碱受体亚基 | 第17-19页 |
| ·烟碱型乙酰胆碱受体亚基的作用与结构特点 | 第17-18页 |
| ·烟碱型乙酰胆碱受体亚基的研究现状 | 第18-19页 |
| ·烟碱型乙酰胆碱受体亚基的研究意义 | 第19页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-44页 |
| ·实验材料 | 第20-24页 |
| ·蜜蜂 | 第20页 |
| ·中蜂饲养与处理 | 第20页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第20-21页 |
| ·PCR 引物 | 第21-24页 |
| ·实验方法 | 第24-44页 |
| ·中华蜜蜂总 RNA 的提取及检测 | 第24-25页 |
| ·利用 TRIZOL 试剂盒提取 RNA | 第24页 |
| ·RNA 中基因组 DNA 的去除 | 第24页 |
| ·甲醛变性凝胶进行 RNA 电泳 | 第24-25页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第25页 |
| ·cDNA 纯化（用于 5' RACE） | 第25-26页 |
| ·cDNA 的末端加尾反应（用于 5' RACE） | 第26页 |
| ·中华蜜蜂目的基因 cDNA 全长序列的获得 | 第26-29页 |
| ·中华蜜蜂目的基因中间片段的获得 | 第26-27页 |
| ·RACE 法获得 5'端序列 | 第27页 |
| ·RACE 法获得 3'端序列 | 第27-28页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第28-29页 |
| ·目的片段的回收 | 第29页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第30页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取 | 第30-32页 |
| ·大量法提取质粒 DNA | 第30-31页 |
| ·试剂盒质粒微量提取方案 | 第31-32页 |
| ·对重组质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·中华蜜蜂目的基因 DNA 序列测定 | 第32页 |
| ·中华蜜蜂目的基因基因组全长序列的获得 | 第32-34页 |
| ·EasyPureTMGenomic DNA 试剂盒法提取中华蜜蜂基因组总 DNA | 第32-33页 |
| ·中华蜜蜂目的基因基因组全长序列的获得 | 第33-34页 |
| ·中华蜜蜂目的基因启动子的克隆 | 第34-35页 |
| ·中华蜜蜂目的基因启动子的反向 PCR 扩增 | 第34-35页 |
| ·上游启动子序列的分析 | 第35页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测基因的表达 | 第35-37页 |
| ·中华蜜蜂总 RNA 的提取 | 第35页 |
| ·反转录 cDNA 第一条链的合成 | 第35-36页 |
| ·荧光定量 PCR 检测的反应体系和反应条件 | 第36页 |
| ·数据处理 | 第36-37页 |
| ·半定量 RT-PCR 分析 | 第37页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第37页 |
| ·反转录 cDNA 第一条链的合成 | 第37页 |
| ·半定量 RT-PCR 检测 | 第37页 |
| ·原核表达及抗体制备 | 第37-40页 |
| ·实验试剂配制 | 第37-38页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第38页 |
| ·E.coli BL21 原核表达蛋白的诱导 | 第38页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第38-39页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第39页 |
| ·抗体的制备 | 第39-40页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第40页 |
| ·免疫酶联吸附测定检测 | 第40页 |
| ·Western blotting 分析 | 第40-41页 |
| ·免疫组织酶化学技术 | 第41-42页 |
| ·组织的分离处理 | 第41页 |
| ·组织石蜡切片的制作 | 第41页 |
| ·免疫组织酶化学分析 | 第41-42页 |
| ·GST 酶活测定 | 第42-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-71页 |
| ·中华蜜蜂 AccGSTs4 基因的克隆与特性分析 | 第44-51页 |
| ·总 RNA 的提取及反转录 | 第44页 |
| ·中华蜜蜂 AccGSTs4 基因全长 cDNA 序列的获得 | 第44-45页 |
| ·中华蜜蜂 AccGSTs4 cDNA 序列分析 | 第45-46页 |
| ·中华蜜蜂 AccGSTs4 启动子序列分析 | 第46-47页 |
| ·中华蜜蜂 AccGSTs4 表达特性分析 | 第47-51页 |
| ·中华蜜蜂 AccGSTs4 在不同的发育时期的表达特性 | 第47-48页 |
| ·中华蜜蜂 AccGSTs4 的免疫组化特性分析 | 第48-50页 |
| ·饲养 HgCl2对中蜂幼虫中 GSTs4 基因表达的影响 | 第50页 |
| ·HgCl2处理后的菌落扩散情况分析 | 第50-51页 |
| ·中华蜜蜂 AccCacyBP 基因的克隆与特性分析 | 第51-59页 |
| ·总 RNA 的提取及反转录 | 第51页 |
| ·中华蜜蜂 AccCacyBP 基因全长 cDNA 序列的获得 | 第51-54页 |
| ·中华蜜蜂 AccCacyBP 启动子序列分析 | 第54页 |
| ·中华蜜蜂 AccCacyBP 表达特性分析 | 第54-59页 |
| ·中华蜜蜂 AccCacyBP 在不同发育时期和不同组织部位的表达特性分析 | 第54-55页 |
| ·中华蜜蜂 AccCacyBP 在脑部中的免疫定位分析 | 第55-57页 |
| ·中华蜜蜂 AccCacyBP 在脑部发育中的表达特性分析 | 第57-58页 |
| ·中华蜜蜂 AccCacyBP 在应激反应中的表达特性分析 | 第58-59页 |
| ·中华蜜蜂 Accβ1 和 Accβ2 基因的克隆与特性分析 | 第59-71页 |
| ·总 RNA 的提取及反转录 | 第59-60页 |
| ·中华蜜蜂 Accβ1 和 Accβ2 基因全长 cDNA 序列的获得与特性分析 | 第60页 |
| ·中华蜜蜂 Accβ1 和 Accβ2 cDNA 序列分析 | 第60-63页 |
| ·中华蜜蜂 Accβ1 和 Accβ2 基因组序列分析 | 第63-65页 |
| ·中华蜜蜂 Accβ1 和 Accβ2 启动子序列分析 | 第65-67页 |
| ·中华蜜蜂 Accβ1 和 Accβ2 表达特性分析 | 第67-71页 |
| ·中华蜜蜂 Accβ1 和 Accβ2 在不同组织部位和不同发育时期的表达特性 | 第67页 |
| ·中华蜜蜂 Accβ1 和 Accβ2 对杀虫剂和环境应激反应的表达特性分析 | 第67-71页 |
| 4 讨论 | 第71-77页 |
| ·中华蜜蜂 AccGSTs4 基因的分离与抗逆性表达特性分析 | 第71-73页 |
| ·中华蜜蜂 AccGSTs4 基因的序列分析 | 第71页 |
| ·中华蜜蜂 AccGSTs4 基因的抗逆性表达特性分析 | 第71-73页 |
| ·中华蜜蜂 AccCacyBP 基因的分离与抗逆性表达特性分析 | 第73-75页 |
| ·中华蜜蜂 AccCacyBP 基因的序列分析 | 第73页 |
| ·中华蜜蜂 AccCacyBP 基因的抗逆性表达特性分析 | 第73-75页 |
| ·中华蜜蜂 Accβ1 和 Accβ2 基因的分离与抗逆性表达特性分析 | 第75-77页 |
| ·中华蜜蜂 Accβ1 和 Accβ2 基因的序列分析 | 第75页 |
| ·中华蜜蜂 Accβ1 和 Accβ2 基因的抗逆性表达特性分析 | 第75-77页 |
| 5 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 本论文研究课题来源 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读学位期间发表的主要学术论文 | 第86页 |
