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中华蜜蜂核糖体蛋白家族及MAPK信号途径相关基因的生物学特征分析

中文摘要第1-11页
英文摘要第11-14页
1 前言第14-22页
   ·中华蜜蜂的生物学特征及重要地位第14页
   ·中华蜜蜂重要生物学特性相关功能基因研究进展第14-16页
   ·核糖体蛋白家族概述第16-18页
     ·核糖体的结构特点第16页
     ·核糖体蛋白的分类与功能第16-17页
     ·核糖体蛋白 L17第17页
     ·核糖体蛋白 L11第17-18页
   ·TAK1 概述第18-21页
     ·MAPKKK 特征第18-19页
     ·TAK1 的发现第19页
     ·TGF β信号通路第19-20页
     ·TAK1 与生长发育第20-21页
   ·本研究的目的及意义第21-22页
2 材料与方法第22-50页
   ·实验材料第22-25页
     ·蜜蜂材料第22页
     ·菌株与质粒第22页
     ·酶与各种生化试剂第22页
     ·PCR 引物第22-25页
   ·实验方法第25-50页
     ·中华蜜蜂的饲养及处理第25-27页
     ·中华蜜蜂总 RNA 的提取第27-28页
       ·利用 Trizol 试剂提取总 RNA第27页
       ·总 RNA 的提纯第27-28页
     ·cDNA 的合成及纯化第28页
     ·cDNA 末端加尾反应(5'末端)第28-29页
     ·目的片段的回收、连接及转化第29-30页
       ·目的片段的回收第29页
       ·目的片段与克隆载体的连接第29-30页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化第30页
     ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取及酶切鉴定第30-31页
       ·试剂盒微量提取质粒第30-31页
       ·重组质粒的酶切鉴定第31页
     ·DNA 序列测定第31页
     ·AccRPL11 基因全长 cDNA 序列获得第31-35页
       ·中间片段序列的获得第31-33页
       ·5'末端序列的获得第33-34页
       ·3'末端序列的获得第34-35页
       ·全长 cDNA 序列的获得第35页
     ·中华蜜蜂基因组 DNA 的提取及纯化第35-36页
       ·试剂盒小量法提取基因组 DNA第35-36页
       ·大量法提取基因组 DNA第36页
     ·AccRPL11 基因全长基因组序列的获得第36-37页
     ·AccRPL11 基因启动子序列的获得第37-39页
     ·Southern 杂交第39-40页
       ·限制性内切酶消化第39页
       ·转膜与烘膜第39页
       ·探针合成第39-40页
       ·预杂交与杂交第40页
     ·Northern 杂交第40-41页
       ·RNA 的变性琼脂糖凝胶电泳第40-41页
       ·转膜与烘膜第41页
       ·探针合成第41页
       ·预杂交与杂交第41页
     ·双链 RNA(dsRNA)的合成第41-42页
       ·dsRNA 模板的制备第41页
       ·dsAccRPL11 合成第41-42页
       ·dsAccRPL11 的注射第42页
     ·原核表达第42-44页
       ·原核表达载体的构建第42-43页
       ·大肠杆菌原核表达的诱导第43页
       ·目的蛋白的提纯第43-44页
       ·试剂盒纯化目的蛋白第44页
     ·抗体的制备及特异性检测第44-46页
       ·抗体的制备第44页
       ·ELISA 检测第44-45页
       ·Western bolt第45-46页
     ·免疫组织化学技术第46-47页
       ·组织的分离处理第46页
       ·组织石蜡切片的制作第46页
       ·免疫组织酶化学分析第46-47页
       ·免疫组织荧光化学分析第47页
     ·半定量 PCR 分析第47-48页
     ·实时荧光定量 PCR 分析第48-49页
       ·引物及反应条件的确定第48页
       ·实时荧光定量 PCR 检测基因表达第48页
       ·数据处理第48-49页
     ·数据库及网络资源第49页
     ·生物学软件第49-50页
3 结果与分析第50-80页
   ·AccRPL17 基因研究结果分析第50-61页
     ·AccRPL17 基因全长 cDNA 的分离及序列分析第50-51页
     ·AccRPL17 氨基酸序列结果特征分析第51-53页
     ·AccRPL17 基因组结构分析第53-54页
     ·AccRPL17 启动子的分离及序列分析第54-55页
     ·AccRPL17 的表达特性分析第55-58页
       ·AccRPL17 在不同发育阶段及组织部位中的表达特性第55-56页
       ·AccRPL17 在不同非生物应激中的表达特性第56-58页
     ·AccRPL17 的原核表达及抗体检测第58-59页
       ·AccRPL17 蛋白的诱导第58页
       ·AccRPL17 多克隆抗体的检测第58-59页
     ·AccRPL17 蛋白在蜜蜂组织内的定位第59-61页
   ·AccRPL11 基因研究结果分析第61-72页
     ·AccRPL11 基因 cDNA 序列分析第61页
     ·AccRPL11 氨基酸特征第61-63页
     ·AccRPL11 基因组特征第63-64页
     ·AccRPL11 启动子特征第64-65页
     ·AccRPL11 的原核表达及抗体检测第65-66页
     ·AccRPL11 的表达特性分析第66-68页
       ·AccRPL11 在不同发育阶段及组织部位中的表达特性第66页
       ·AccRPL11 在不同非生物应激中的表达特性第66-68页
     ·AccRPL11 基因的 RNAi 沉默第68-72页
       ·AccRPL11 基因 RNAi 沉默时间的确定第68-69页
       ·AccRPL11 基因 RNAi 沉默现象第69-72页
   ·AccTAK1 基因研究结果分析第72-80页
     ·AccTAK1 基因特征第72-75页
       ·AccTAK1 基因 cDNA 序列分析第72页
       ·AccTAK1 氨基酸特征第72-75页
     ·AccTAK1 基因组特征第75-76页
     ·AccTAK1 的表达特性分析第76-79页
       ·AccTAK1 在不同发育阶段及组织部位中的表达特性第76-77页
       ·AccTAK1 在不同非生物应激中的表达特性第77-79页
     ·AccTAK1 在 4 日龄幼虫中的定位第79-80页
4 讨论第80-86页
5 结论第86-87页
参考文献第87-94页
本论文研究课题来源第94-95页
致谢第95-96页
攻读学位期间发表及拟发表论文情况第96页

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