中文摘要 | 第1-11页 |
英文摘要 | 第11-14页 |
1 前言 | 第14-22页 |
·中华蜜蜂的生物学特征及重要地位 | 第14页 |
·中华蜜蜂重要生物学特性相关功能基因研究进展 | 第14-16页 |
·核糖体蛋白家族概述 | 第16-18页 |
·核糖体的结构特点 | 第16页 |
·核糖体蛋白的分类与功能 | 第16-17页 |
·核糖体蛋白 L17 | 第17页 |
·核糖体蛋白 L11 | 第17-18页 |
·TAK1 概述 | 第18-21页 |
·MAPKKK 特征 | 第18-19页 |
·TAK1 的发现 | 第19页 |
·TGF β信号通路 | 第19-20页 |
·TAK1 与生长发育 | 第20-21页 |
·本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
2 材料与方法 | 第22-50页 |
·实验材料 | 第22-25页 |
·蜜蜂材料 | 第22页 |
·菌株与质粒 | 第22页 |
·酶与各种生化试剂 | 第22页 |
·PCR 引物 | 第22-25页 |
·实验方法 | 第25-50页 |
·中华蜜蜂的饲养及处理 | 第25-27页 |
·中华蜜蜂总 RNA 的提取 | 第27-28页 |
·利用 Trizol 试剂提取总 RNA | 第27页 |
·总 RNA 的提纯 | 第27-28页 |
·cDNA 的合成及纯化 | 第28页 |
·cDNA 末端加尾反应(5'末端) | 第28-29页 |
·目的片段的回收、连接及转化 | 第29-30页 |
·目的片段的回收 | 第29页 |
·目的片段与克隆载体的连接 | 第29-30页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第30页 |
·大肠杆菌质粒 DNA 的提取及酶切鉴定 | 第30-31页 |
·试剂盒微量提取质粒 | 第30-31页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第31页 |
·DNA 序列测定 | 第31页 |
·AccRPL11 基因全长 cDNA 序列获得 | 第31-35页 |
·中间片段序列的获得 | 第31-33页 |
·5'末端序列的获得 | 第33-34页 |
·3'末端序列的获得 | 第34-35页 |
·全长 cDNA 序列的获得 | 第35页 |
·中华蜜蜂基因组 DNA 的提取及纯化 | 第35-36页 |
·试剂盒小量法提取基因组 DNA | 第35-36页 |
·大量法提取基因组 DNA | 第36页 |
·AccRPL11 基因全长基因组序列的获得 | 第36-37页 |
·AccRPL11 基因启动子序列的获得 | 第37-39页 |
·Southern 杂交 | 第39-40页 |
·限制性内切酶消化 | 第39页 |
·转膜与烘膜 | 第39页 |
·探针合成 | 第39-40页 |
·预杂交与杂交 | 第40页 |
·Northern 杂交 | 第40-41页 |
·RNA 的变性琼脂糖凝胶电泳 | 第40-41页 |
·转膜与烘膜 | 第41页 |
·探针合成 | 第41页 |
·预杂交与杂交 | 第41页 |
·双链 RNA(dsRNA)的合成 | 第41-42页 |
·dsRNA 模板的制备 | 第41页 |
·dsAccRPL11 合成 | 第41-42页 |
·dsAccRPL11 的注射 | 第42页 |
·原核表达 | 第42-44页 |
·原核表达载体的构建 | 第42-43页 |
·大肠杆菌原核表达的诱导 | 第43页 |
·目的蛋白的提纯 | 第43-44页 |
·试剂盒纯化目的蛋白 | 第44页 |
·抗体的制备及特异性检测 | 第44-46页 |
·抗体的制备 | 第44页 |
·ELISA 检测 | 第44-45页 |
·Western bolt | 第45-46页 |
·免疫组织化学技术 | 第46-47页 |
·组织的分离处理 | 第46页 |
·组织石蜡切片的制作 | 第46页 |
·免疫组织酶化学分析 | 第46-47页 |
·免疫组织荧光化学分析 | 第47页 |
·半定量 PCR 分析 | 第47-48页 |
·实时荧光定量 PCR 分析 | 第48-49页 |
·引物及反应条件的确定 | 第48页 |
·实时荧光定量 PCR 检测基因表达 | 第48页 |
·数据处理 | 第48-49页 |
·数据库及网络资源 | 第49页 |
·生物学软件 | 第49-50页 |
3 结果与分析 | 第50-80页 |
·AccRPL17 基因研究结果分析 | 第50-61页 |
·AccRPL17 基因全长 cDNA 的分离及序列分析 | 第50-51页 |
·AccRPL17 氨基酸序列结果特征分析 | 第51-53页 |
·AccRPL17 基因组结构分析 | 第53-54页 |
·AccRPL17 启动子的分离及序列分析 | 第54-55页 |
·AccRPL17 的表达特性分析 | 第55-58页 |
·AccRPL17 在不同发育阶段及组织部位中的表达特性 | 第55-56页 |
·AccRPL17 在不同非生物应激中的表达特性 | 第56-58页 |
·AccRPL17 的原核表达及抗体检测 | 第58-59页 |
·AccRPL17 蛋白的诱导 | 第58页 |
·AccRPL17 多克隆抗体的检测 | 第58-59页 |
·AccRPL17 蛋白在蜜蜂组织内的定位 | 第59-61页 |
·AccRPL11 基因研究结果分析 | 第61-72页 |
·AccRPL11 基因 cDNA 序列分析 | 第61页 |
·AccRPL11 氨基酸特征 | 第61-63页 |
·AccRPL11 基因组特征 | 第63-64页 |
·AccRPL11 启动子特征 | 第64-65页 |
·AccRPL11 的原核表达及抗体检测 | 第65-66页 |
·AccRPL11 的表达特性分析 | 第66-68页 |
·AccRPL11 在不同发育阶段及组织部位中的表达特性 | 第66页 |
·AccRPL11 在不同非生物应激中的表达特性 | 第66-68页 |
·AccRPL11 基因的 RNAi 沉默 | 第68-72页 |
·AccRPL11 基因 RNAi 沉默时间的确定 | 第68-69页 |
·AccRPL11 基因 RNAi 沉默现象 | 第69-72页 |
·AccTAK1 基因研究结果分析 | 第72-80页 |
·AccTAK1 基因特征 | 第72-75页 |
·AccTAK1 基因 cDNA 序列分析 | 第72页 |
·AccTAK1 氨基酸特征 | 第72-75页 |
·AccTAK1 基因组特征 | 第75-76页 |
·AccTAK1 的表达特性分析 | 第76-79页 |
·AccTAK1 在不同发育阶段及组织部位中的表达特性 | 第76-77页 |
·AccTAK1 在不同非生物应激中的表达特性 | 第77-79页 |
·AccTAK1 在 4 日龄幼虫中的定位 | 第79-80页 |
4 讨论 | 第80-86页 |
5 结论 | 第86-87页 |
参考文献 | 第87-94页 |
本论文研究课题来源 | 第94-95页 |
致谢 | 第95-96页 |
攻读学位期间发表及拟发表论文情况 | 第96页 |