| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 第一章 综述 | 第15-32页 |
| ·用单加氧酶进行的生物催化 | 第15-16页 |
| ·黄素蛋白单加氧酶 | 第16-18页 |
| ·黄素蛋白单加氧酶的分类 | 第18-22页 |
| ·单组分黄素蛋白单加氧酶 | 第20-21页 |
| ·多组分黄素蛋白单加氧酶 | 第21-22页 |
| ·B类黄素蛋白单加氧酶 | 第22-24页 |
| ·黄素依赖型单加氧酶(FMO) | 第22-23页 |
| ·微生物的N-羟基化的单加氧酶(NMO) | 第23页 |
| ·Baeyer-Villiger型单加氧酶(BVMO) | 第23-24页 |
| ·细菌中黄素依赖型单加氧酶的研究进展 | 第24-30页 |
| ·细菌中黄素依赖型单加氧酶的发现 | 第25页 |
| ·细菌中黄素依赖型单加氧酶的特征 | 第25-27页 |
| ·细菌中黄素依赖型单加氧酶的催化机理研究 | 第27-30页 |
| ·本课题的研究意义 | 第30-32页 |
| 第二章 细菌中FMO基因的筛选与分析 | 第32-40页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·实验材料与试剂 | 第32-34页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·实验试剂 | 第32-33页 |
| ·试剂配制 | 第33页 |
| ·实验仪器 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-35页 |
| ·宏基因组文库的构建 | 第34页 |
| ·编码FMO基因的获得 | 第34页 |
| ·FMO基因的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| ·实验结果 | 第35-38页 |
| ·插入片断BY12-20的序列分析 | 第35页 |
| ·bFMOⅡ与已知蛋白结晶的序列比对 | 第35-36页 |
| ·bfmoⅡ与bfmo的密码子偏好性分析 | 第36-37页 |
| ·bFMOⅡ的系统发生树分析 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-40页 |
| 第三章 细菌中FMO基因的克隆与质粒的构建 | 第40-52页 |
| ·前言 | 第40页 |
| ·实验材料与试剂 | 第40-41页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·实验试剂 | 第40-41页 |
| ·实验仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-47页 |
| ·质粒pMD18-T-FMO的构建 | 第41-43页 |
| ·质粒pMD18-T-FMO的验证 | 第43页 |
| ·质粒pET-28a-FMO的构建 | 第43-46页 |
| ·质粒pET-28a-FMO的验证 | 第46-47页 |
| ·实验结果 | 第47-51页 |
| ·编码bFMOⅡ基因的获得 | 第47-48页 |
| ·bFMO基因功能的进一步验证 | 第48页 |
| ·质粒pET-28a-FMO的验证 | 第48-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 BFMO Ⅱ的纯化及相关性质研究 | 第52-69页 |
| ·前言 | 第52页 |
| ·实验材料与试剂 | 第52-55页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·实验试剂 | 第52-53页 |
| ·试剂配制 | 第53-54页 |
| ·实验仪器 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-60页 |
| ·bFMOⅡ粗酶液的制备 | 第55页 |
| ·硫酸铵沉淀bFMOⅡ | 第55-56页 |
| ·Ni柱纯化bFMOⅡ | 第56页 |
| ·蛋白电泳条件 | 第56-58页 |
| ·蛋白质浓度测定方法 | 第58页 |
| ·酶活测定体系 | 第58-59页 |
| ·靛蓝产量的测定 | 第59页 |
| ·bFMOⅡ对吲哚及其衍生物的全细胞催化 | 第59-60页 |
| ·实验结果 | 第60-67页 |
| ·bFMOⅡ诱导条件的优化 | 第60页 |
| ·硫酸铵沉淀bFMOⅡ蛋白条件的优化 | 第60-61页 |
| ·bFMOⅡ的纯化及蛋白电泳 | 第61-62页 |
| ·辅因子FAD的确定 | 第62-64页 |
| ·蛋白质浓度标准曲线绘制 | 第64页 |
| ·bFMOⅡ酶活的测定 | 第64-65页 |
| ·靛蓝产量的测定 | 第65-67页 |
| ·bFMOⅡ对吲哚及吲哚类底物的生物学转化 | 第67页 |
| ·本章小结 | 第67-69页 |
| 第五章 BFMOⅡ突变株的构建与部分活性位点分析 | 第69-84页 |
| ·前言 | 第69页 |
| ·实验材料与试剂 | 第69页 |
| ·实验方法 | 第69-76页 |
| ·bFMOⅡ突变位置的选取 | 第69-72页 |
| ·bFMOⅡ定点突变 | 第72-75页 |
| ·bFMOⅡ同源模建 | 第75页 |
| ·bFMOⅡ模建评估 | 第75-76页 |
| ·bFMOⅡ突变后对生产靛蓝的影响 | 第76页 |
| ·Pymol软件分析 | 第76页 |
| ·实验结果 | 第76-83页 |
| ·含突变体质粒的构建 | 第76-77页 |
| ·bFMOⅡ同源模建 | 第77-79页 |
| ·bFMOⅡ模建评估 | 第79-80页 |
| ·bFMOⅡ突变体对吲哚转化的影响 | 第80-81页 |
| ·bFMOⅡ部分蛋白残基分析 | 第81-83页 |
| ·本章小结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 发表论文和申请专利情况 | 第93页 |