| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-28页 |
| 1 猪链球菌及猪链球菌病 | 第11-19页 |
| ·猪链球菌病及其血清分型 | 第11页 |
| ·猪链球菌2型的毒力(相关)因子 | 第11-15页 |
| ·荚膜多糖 | 第12页 |
| ·溶菌酶释放蛋白和胞外因子 | 第12-13页 |
| ·溶血素 | 第13-14页 |
| ·纤维结合蛋白 | 第14页 |
| ·IgG结合蛋白 | 第14页 |
| ·谷氨酸脱氢酶蛋白 | 第14-15页 |
| ·猪链球菌2型的流行病学及可能的致病机理 | 第15-18页 |
| ·猪链球菌2型的流行病学 | 第15页 |
| ·猪链球菌2型可能的致病机理 | 第15-18页 |
| ·猪链球菌2型的免疫与预防 | 第18-19页 |
| 2 蛋白质组学的研究进展 | 第19-27页 |
| ·蛋白质组学的研究现状 | 第19-20页 |
| ·蛋白质组学研究的主要技术 | 第20-24页 |
| ·蛋白质样品制备技术 | 第21页 |
| ·蛋白质分离技术 | 第21-22页 |
| ·蛋白质组的高通量鉴定技术—生物质谱 | 第22-24页 |
| ·生物信息学分析 | 第24页 |
| ·分泌蛋白质组研究进展 | 第24-26页 |
| ·不同环境条件下分泌蛋白质组的变化 | 第24-25页 |
| ·寻找生物标志物或药物靶标 | 第25-26页 |
| ·新抗生素的发现和疫苗研制 | 第26页 |
| ·分泌蛋白质组学的应用前景及展望 | 第26-27页 |
| 3 研究目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 猪链球菌2型分泌蛋白的差异蛋白质组学研究 | 第28-58页 |
| 1 前言 | 第28-29页 |
| 2 实验材料 | 第29-32页 |
| ·菌株及培养基 | 第29页 |
| ·主要实验仪器 | 第29页 |
| ·主要化学试剂 | 第29-30页 |
| ·主要溶液配方 | 第30-32页 |
| 3 方法 | 第32-42页 |
| ·PCR鉴定菌株毒力因子 | 第32-33页 |
| ·引物的设计与合成 | 第32-33页 |
| ·PCR反应程序 | 第33页 |
| ·SC-21菌株的培养条件 | 第33页 |
| ·分泌蛋白样品的制备 | 第33页 |
| ·THB培养基蛋白样品的制备 | 第33-34页 |
| ·蛋白定量 | 第34页 |
| ·精确定量:Quantity Kit定量 | 第34页 |
| ·粗略定量:Bradford法 | 第34页 |
| ·1D SDS-PAGE电泳 | 第34页 |
| ·双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE) | 第34-37页 |
| ·IEF | 第34-35页 |
| ·IPG胶条平衡 | 第35-36页 |
| ·灌制凝胶 | 第36页 |
| ·胶条的转移 | 第36页 |
| ·打开循环水浴 | 第36页 |
| ·参数设置 | 第36页 |
| ·凝胶染色(银染) | 第36-37页 |
| ·图像扫描及分析 | 第37页 |
| ·差异蛋白质点的鉴定 | 第37-38页 |
| ·切取蛋白点 | 第37页 |
| ·胶内酶解 | 第37-38页 |
| ·LC/ESI-MS/MS质谱分析及数据库搜索 | 第38页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第38-42页 |
| ·基本原理 | 第38-39页 |
| ·总RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·cDNA的合成 | 第40页 |
| ·引物的合成 | 第40-41页 |
| ·实时荧光定量PCR检测 | 第41-42页 |
| 4 结果 | 第42-51页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第42页 |
| ·分泌蛋白样品含量测定 | 第42-43页 |
| ·两种温度条件下的分泌蛋白的1D SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| ·SC-21在两种温度条件下的分泌蛋白表达谱差异分析 | 第44-48页 |
| ·实时荧光定量PCR的扩增结果 | 第48-51页 |
| ·体外诱导培养的mRNA的相对表达水平 | 第49-50页 |
| ·发热猪体内的mRNA的相对表达水平 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-58页 |
| ·关于SC-21菌株培养条件的确定 | 第53页 |
| ·关于SC-21的分泌蛋白样品及LC/ESI-MS/MS鉴定方法的应用 | 第53-54页 |
| ·高温对SC-21分泌蛋白表达谱的影响 | 第54页 |
| ·实时荧光定量PCR在本研究中的应用 | 第54-55页 |
| ·关于分泌蛋白图谱中的差异蛋白 | 第55-58页 |
| ·核酸酶SsnA | 第55-56页 |
| ·肽聚糖水解酶CHAP | 第56页 |
| ·ABC转运蛋白—谷氨酸盐底物结合蛋白:ABC-transporter substrate-binding protein-glutamine transport | 第56-58页 |
| 第三章 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67页 |
