| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-32页 |
| 1 α-淀粉酶的概述 | 第9-12页 |
| ·α-淀粉酶的性质 | 第9-11页 |
| ·α-淀粉酶的生产 | 第11-12页 |
| 2 耐高温α-淀粉酶 | 第12-17页 |
| ·耐高温α-淀粉酶的结构 | 第12-13页 |
| ·热稳定性 | 第13-14页 |
| ·pH值范围 | 第14页 |
| ·酶与金属离子 | 第14页 |
| ·耐高温α-淀粉酶的应用 | 第14-15页 |
| ·耐高温α-淀粉酶生产菌株的育种进展 | 第15-17页 |
| 3 芽孢杆菌表达系统 | 第17-26页 |
| ·芽孢杆菌表达系统发展简史 | 第17-18页 |
| ·芽孢杆菌表达系统概述 | 第18页 |
| ·芽孢杆菌表达系统的载体 | 第18-22页 |
| ·芽孢杆菌表达系统中表达的基因 | 第22-23页 |
| ·枯草杆菌表达系统存在问题及今后发展方向 | 第23-26页 |
| 参考文献 | 第26-32页 |
| 第二章 Bacillus lichenifmis B13耐高温α-淀粉酶基因的克隆、序列分析和在大肠杆菌中的表达 | 第32-44页 |
| 1 材料和方法 | 第32-37页 |
| ·菌株、质粒 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·酶、引物、抗生素和试剂 | 第32页 |
| ·地衣芽孢杆菌B13基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌普通感受态细胞的制备及转化 | 第33页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第33-34页 |
| ·质粒DNA的小量酶切 | 第34页 |
| ·目的基因和T载体的酶连体系 | 第34页 |
| ·DNA的回收纯化 | 第34-35页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第35页 |
| ·Bacillus lichenifomis B13耐高温α-淀粉酶基因(amy)的扩增 | 第35-36页 |
| ·amy基因的T-A克隆和测序 | 第36页 |
| ·测序结果分析 | 第36页 |
| ·B.licheniformis B13耐高温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的鉴定 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-41页 |
| ·B.lichenifomis B13耐高温α-淀粉酶基因(amy)的克隆及序列分析 | 第37-39页 |
| ·B.licheniformis B13耐高温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中表达产物的鉴定 | 第39-41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| 本章小结 | 第42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 第三章 B.lichenifomis B13耐高温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第44-57页 |
| 1 材料和方法 | 第44-51页 |
| ·菌株、质粒 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44-45页 |
| ·试剂和酶 | 第45页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第45页 |
| ·质粒DNA的大量酶切 | 第45页 |
| ·DNA片段酶连体系的建立 | 第45-46页 |
| ·DNA片段的去磷酸化 | 第46页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态的制备及转化 | 第46页 |
| ·同源重组载体载体pDGIEF-ery的构建 | 第46-47页 |
| ·B.subtilis WB800D的构建 | 第47页 |
| ·穿梭表达载体pUBC19-amy的构建 | 第47页 |
| ·表达菌株B.subtilis WB800D(pUBC19-amy)的构建 | 第47-48页 |
| ·表达菌株B.subtilis WB800D(pUBC19-amy)耐高温α-淀粉酶的活性检测以及表达产物的SDS-PAGE分析 | 第48-51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-54页 |
| ·B.subtilis WB800B中淀粉酶基因的敲除 | 第51-52页 |
| ·表达菌株B.subtilis WB800D(pUBC19-amy)的构建 | 第52-53页 |
| ·表达菌株B.subtilis WB800D(pUBC19-amy)耐高温α-淀粉酶的活性检测以及表达产物的SDS-PAGE分析 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 本章小结 | 第55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 第四章 P43启动子促进耐高温α-淀粉酶基因在芽孢杆菌WB800D中高效表达 | 第57-66页 |
| 1 材料和方法 | 第57-60页 |
| ·菌株、质粒 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·试剂和酶 | 第57页 |
| ·分子操作 | 第57页 |
| ·耐高温α-淀粉酶活力测定方法 | 第57-58页 |
| ·含有信号肽序列的amy基因片段扩增 | 第58-59页 |
| ·穿梭表达载体pP43NMK-amy的构建 | 第59页 |
| ·表达菌株B.subtilis WB800D(pP43NMK-amy)的构建 | 第59-60页 |
| ·表达菌株B.subtilis WBS00D(pP43NMK-amy)耐高温α-淀粉酶的活性检测及SDS-PAGE分析 | 第60页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达菌株的发酵实验 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-63页 |
| ·表达菌株B.subtilis WB800D(pP43NMK-amy)的构建 | 第60-61页 |
| ·表达菌株B.subtilis WB800D(pP43NMK-amy)耐高温α-淀粉酶的活性检测及SDS-PAGE分析 | 第61-63页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达菌株的发酵实验 | 第63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| 4 本章小结 | 第64页 |
| 参考文献 | 第64-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 附录1 实验用培养基及分子生物学试剂 | 第66-67页 |
| 附录2 枯草杆菌普通化学感受态细胞制备用试剂 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
