摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-14页 |
前言 | 第14-15页 |
第一章 皮肤干细胞研究进展 | 第15-36页 |
·皮肤干细胞的在体分布模式 | 第15-19页 |
·表皮干细胞与表皮增殖单位 (Epidermal Proliferation unit. EPU)学说 | 第15-16页 |
·网状嵴分布模式 | 第16页 |
·毛囊干细胞与窿突激活假说(bulge-activation hypothesis) | 第16-19页 |
·KSC 的概念与生物学特征 | 第19-26页 |
·KSC 的概念 | 第19-20页 |
·KSC 的慢周期性 | 第20页 |
·KSC 的自我更新能力 | 第20-21页 |
·KSC 的粘附特性 | 第21-22页 |
·KSC 的其他特征 | 第22页 |
·KSC 的分子标记 | 第22-26页 |
·整合素 | 第22-23页 |
·角蛋白 | 第23-24页 |
·P63 转录因子 | 第24页 |
·增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen ,PCNA) | 第24-25页 |
·CD71 | 第25页 |
·连接蛋白43 ( Connexin 43 ,Cx43) | 第25页 |
·C8/ 144B | 第25-26页 |
·CD34 | 第26页 |
·KSC 的增殖分化的分子调控机制 | 第26-32页 |
·整合素—丝裂原激活蛋白激酶(MAPK) 通路 | 第27-28页 |
·Wnt—β-catenin—Lef/Tcf | 第28-30页 |
·Notch 信号传导通路 | 第30-32页 |
·C-MYC | 第32页 |
·影响KSC 体外扩增的因素 | 第32-36页 |
·血清 | 第32-33页 |
·细胞因子 | 第33-34页 |
·碱性成纤维细胞生长因子(basic-Fibroblast Growth Factor,bFGF) | 第33页 |
·表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF) | 第33-34页 |
·胰岛素样生长因子-1(Insulin-like Growth Factor-1,IGF-1) | 第34页 |
·谷氨酰胺 | 第34页 |
·β-巯基乙醇 | 第34页 |
·细胞外基质(ECM) | 第34-36页 |
第二章 表皮干细胞的可塑性 | 第36-40页 |
·成体干细胞的可塑性 | 第36-37页 |
·干细胞可塑性的解释 | 第37-39页 |
·细胞融合现象 | 第37-38页 |
·横向分化现象 | 第38-39页 |
·存在问题及展望 | 第39页 |
·表皮干细胞的分化潜能与可塑性 | 第39-40页 |
第三章 绿色荧光蛋白(GFP)基因研究现状 | 第40-44页 |
·GFP 基因的生物化学特性 | 第40页 |
·转染技术研究方法 | 第40-44页 |
·病毒载体 | 第40-41页 |
·逆转录病毒载体 | 第40-41页 |
·腺病毒载体 | 第41页 |
·非病毒载体 | 第41-44页 |
·脂质体转染 | 第41-42页 |
·DNA 直接注射 | 第42页 |
·颗粒介导的基因转移 | 第42页 |
·电穿孔法 | 第42页 |
·磷酸钙共沉淀法 | 第42-43页 |
·阳离子聚合物法 | 第43-44页 |
第四章 KSC 的分离纯化及鉴定 | 第44-56页 |
·材料与方法 | 第44-49页 |
·材料 | 第44-45页 |
·试验动物 | 第44页 |
·主要试剂 | 第44-45页 |
·主要仪器设备 | 第45页 |
·方法 | 第45-49页 |
·溶液配制与试剂分装 | 第45-46页 |
·原代表皮干细胞的获得 | 第46-47页 |
·组织块法 | 第46页 |
·DispaseII 酶消化法 | 第46-47页 |
·胰酶消化法 | 第47页 |
·表皮干细胞的纯化与传代培养 | 第47页 |
·冷冻与解冻 | 第47页 |
·KSC 生长曲线测定 | 第47-48页 |
·细胞贴壁率测定 | 第48页 |
·KSC 细胞克隆形成试验 | 第48页 |
·免疫组化染色 | 第48-49页 |
·统计学处理 | 第49页 |
·结果 | 第49-54页 |
·组织块法分离的KSC 的生长情况 | 第49-50页 |
·DISPASEII 酶消化法分离的KSC 的生长情况 | 第50-51页 |
·胰酶消化法分离的KSC 的生长情况 | 第51页 |
·传代KSC 生长状况 | 第51页 |
·细胞解冻活力检测 | 第51-52页 |
·KSC 生长曲线测定 | 第52页 |
·细胞贴壁率测定 | 第52-53页 |
·细胞克隆形成试验 | 第53页 |
·免疫组化染色鉴定 | 第53-54页 |
·讨论 | 第54-56页 |
·KSC 的分离纯化方法 | 第54页 |
·KSC 的鉴定 | 第54-55页 |
·小结 | 第55-56页 |
第五章 KSC 的诱导分化研究 | 第56-61页 |
·材料与方法 | 第56-57页 |
·材料 | 第56页 |
·实验试剂 | 第56页 |
·实验仪器 | 第56页 |
·方法 | 第56-57页 |
·主要溶液配制 | 第56-57页 |
·向心肌细胞诱导分化 | 第57页 |
·向神经细胞诱导分化 | 第57页 |
·向成骨细胞诱导分化 | 第57页 |
·诱导分化细胞免疫组织化学染色鉴定 | 第57页 |
·成骨诱导细胞的茜素红染色 | 第57页 |
·成骨诱导细胞的AKP 染色 | 第57页 |
·结果 | 第57-59页 |
·向心肌细胞诱导分化 | 第57-58页 |
·向神经细胞诱导分化 | 第58-59页 |
·向成骨细胞诱导分化 | 第59页 |
·讨论 | 第59-60页 |
·向心肌细胞诱导 | 第59-60页 |
·向神经细胞诱导分化 | 第60页 |
·向成骨细胞诱导分化 | 第60页 |
·小结 | 第60-61页 |
第六章 KSC 的GFP 基因转染研究 | 第61-65页 |
·材料与方法 | 第61-62页 |
·材料 | 第61页 |
·实验试剂 | 第61页 |
·实验仪器 | 第61页 |
·方法 | 第61-62页 |
·溶液配制 | 第61页 |
·G418 最小致死浓度筛选试验 | 第61页 |
·PEGFP-C1 转染KSC | 第61-62页 |
·转染效率及荧光蛋白阳性表达率的测定 | 第62页 |
·未转染细胞及转染细胞的比较 | 第62页 |
·细胞形态 | 第62页 |
·MTT 比色法测定细胞活性 | 第62页 |
·结果 | 第62-63页 |
·G418 对KSC 最小致死浓度 | 第62页 |
·GFP 转染KSC 细胞 | 第62-63页 |
·未转染细胞及转染细胞的比较 | 第63页 |
·显微镜观察 | 第63页 |
·MTT 比色法测定细胞活性 | 第63页 |
·讨论 | 第63-64页 |
·小结 | 第64-65页 |
结论 | 第65-66页 |
参考文献 | 第66-74页 |
致 谢 | 第74-76页 |
作者简介 | 第76页 |