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山羊皮肤干细胞及绿色荧光蛋白基因转染研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
前言第14-15页
第一章 皮肤干细胞研究进展第15-36页
   ·皮肤干细胞的在体分布模式第15-19页
     ·表皮干细胞与表皮增殖单位 (Epidermal Proliferation unit. EPU)学说第15-16页
     ·网状嵴分布模式第16页
     ·毛囊干细胞与窿突激活假说(bulge-activation hypothesis)第16-19页
   ·KSC 的概念与生物学特征第19-26页
     ·KSC 的概念第19-20页
     ·KSC 的慢周期性第20页
     ·KSC 的自我更新能力第20-21页
     ·KSC 的粘附特性第21-22页
     ·KSC 的其他特征第22页
     ·KSC 的分子标记第22-26页
       ·整合素第22-23页
       ·角蛋白第23-24页
       ·P63 转录因子第24页
       ·增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen ,PCNA)第24-25页
       ·CD71第25页
       ·连接蛋白43 ( Connexin 43 ,Cx43)第25页
       ·C8/ 144B第25-26页
       ·CD34第26页
   ·KSC 的增殖分化的分子调控机制第26-32页
     ·整合素—丝裂原激活蛋白激酶(MAPK) 通路第27-28页
     ·Wnt—β-catenin—Lef/Tcf第28-30页
     ·Notch 信号传导通路第30-32页
     ·C-MYC第32页
   ·影响KSC 体外扩增的因素第32-36页
     ·血清第32-33页
     ·细胞因子第33-34页
       ·碱性成纤维细胞生长因子(basic-Fibroblast Growth Factor,bFGF)第33页
       ·表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)第33-34页
       ·胰岛素样生长因子-1(Insulin-like Growth Factor-1,IGF-1)第34页
       ·谷氨酰胺第34页
       ·β-巯基乙醇第34页
     ·细胞外基质(ECM)第34-36页
第二章 表皮干细胞的可塑性第36-40页
   ·成体干细胞的可塑性第36-37页
   ·干细胞可塑性的解释第37-39页
     ·细胞融合现象第37-38页
     ·横向分化现象第38-39页
   ·存在问题及展望第39页
   ·表皮干细胞的分化潜能与可塑性第39-40页
第三章 绿色荧光蛋白(GFP)基因研究现状第40-44页
   ·GFP 基因的生物化学特性第40页
   ·转染技术研究方法第40-44页
     ·病毒载体第40-41页
       ·逆转录病毒载体第40-41页
       ·腺病毒载体第41页
     ·非病毒载体第41-44页
       ·脂质体转染第41-42页
       ·DNA 直接注射第42页
       ·颗粒介导的基因转移第42页
       ·电穿孔法第42页
       ·磷酸钙共沉淀法第42-43页
       ·阳离子聚合物法第43-44页
第四章 KSC 的分离纯化及鉴定第44-56页
   ·材料与方法第44-49页
     ·材料第44-45页
       ·试验动物第44页
       ·主要试剂第44-45页
       ·主要仪器设备第45页
     ·方法第45-49页
       ·溶液配制与试剂分装第45-46页
       ·原代表皮干细胞的获得第46-47页
         ·组织块法第46页
         ·DispaseII 酶消化法第46-47页
         ·胰酶消化法第47页
       ·表皮干细胞的纯化与传代培养第47页
       ·冷冻与解冻第47页
       ·KSC 生长曲线测定第47-48页
       ·细胞贴壁率测定第48页
       ·KSC 细胞克隆形成试验第48页
       ·免疫组化染色第48-49页
       ·统计学处理第49页
   ·结果第49-54页
     ·组织块法分离的KSC 的生长情况第49-50页
     ·DISPASEII 酶消化法分离的KSC 的生长情况第50-51页
     ·胰酶消化法分离的KSC 的生长情况第51页
     ·传代KSC 生长状况第51页
     ·细胞解冻活力检测第51-52页
     ·KSC 生长曲线测定第52页
     ·细胞贴壁率测定第52-53页
     ·细胞克隆形成试验第53页
     ·免疫组化染色鉴定第53-54页
   ·讨论第54-56页
     ·KSC 的分离纯化方法第54页
     ·KSC 的鉴定第54-55页
     ·小结第55-56页
第五章 KSC 的诱导分化研究第56-61页
   ·材料与方法第56-57页
     ·材料第56页
       ·实验试剂第56页
       ·实验仪器第56页
     ·方法第56-57页
       ·主要溶液配制第56-57页
       ·向心肌细胞诱导分化第57页
       ·向神经细胞诱导分化第57页
       ·向成骨细胞诱导分化第57页
       ·诱导分化细胞免疫组织化学染色鉴定第57页
       ·成骨诱导细胞的茜素红染色第57页
       ·成骨诱导细胞的AKP 染色第57页
   ·结果第57-59页
     ·向心肌细胞诱导分化第57-58页
     ·向神经细胞诱导分化第58-59页
     ·向成骨细胞诱导分化第59页
   ·讨论第59-60页
     ·向心肌细胞诱导第59-60页
     ·向神经细胞诱导分化第60页
     ·向成骨细胞诱导分化第60页
   ·小结第60-61页
第六章 KSC 的GFP 基因转染研究第61-65页
   ·材料与方法第61-62页
     ·材料第61页
       ·实验试剂第61页
       ·实验仪器第61页
     ·方法第61-62页
       ·溶液配制第61页
       ·G418 最小致死浓度筛选试验第61页
       ·PEGFP-C1 转染KSC第61-62页
       ·转染效率及荧光蛋白阳性表达率的测定第62页
       ·未转染细胞及转染细胞的比较第62页
         ·细胞形态第62页
         ·MTT 比色法测定细胞活性第62页
   ·结果第62-63页
     ·G418 对KSC 最小致死浓度第62页
     ·GFP 转染KSC 细胞第62-63页
     ·未转染细胞及转染细胞的比较第63页
       ·显微镜观察第63页
       ·MTT 比色法测定细胞活性第63页
   ·讨论第63-64页
   ·小结第64-65页
结论第65-66页
参考文献第66-74页
致 谢第74-76页
作者简介第76页

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