| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一部分 纳豆激酶 | 第10-16页 |
| 第一章 纳豆激酶液体发酵过程的条件优化和分批补料对产酶的影响 | 第10-16页 |
| ·引言 | 第10页 |
| ·材料与方法 | 第10-12页 |
| ·菌种 | 第10-11页 |
| ·实验试剂 | 第11页 |
| ·培养基 | 第11页 |
| ·实验仪器 | 第11页 |
| ·培养方法 | 第11页 |
| ·分析方法 | 第11-12页 |
| ·结果与讨论 | 第12-14页 |
| ·纳豆激酶的液体发酵条件 | 第12页 |
| ·种子液中添加木糖对发酵的影响 | 第12-13页 |
| ·分批补料对纳豆激酶发酵过程的影响 | 第13-14页 |
| ·本章小结 | 第14-16页 |
| 第二部分 细胞色素P450_(BM | 第16-74页 |
| 第二章 文献综述 | 第16-33页 |
| ·生物产品与下游加工 | 第16-18页 |
| ·生物产品 | 第16页 |
| ·酶的分离纯化 | 第16-17页 |
| ·分离工艺流程的设计 | 第17-18页 |
| ·各种层析方法与原理 | 第18-22页 |
| ·疏水作用层析 | 第18-21页 |
| ·离子交换层析 | 第21-22页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第22页 |
| ·细胞色素P450酶系 | 第22-28页 |
| ·P450底物的广谱性 | 第23-24页 |
| ·P450催化的反应类型 | 第24页 |
| ·P450酶系的催化循环机制 | 第24-25页 |
| ·细胞色素P450酶系研究的热点 | 第25-27页 |
| ·细胞色素P450酶系的运用 | 第27-28页 |
| ·细胞色素P450_(BM-3) | 第28-30页 |
| ·P450_(BM-3)的光谱学特性 | 第29页 |
| ·P450_(BM-3)的催化机制 | 第29-30页 |
| ·P450_(BM-3)的分离纯化工艺 | 第30-31页 |
| ·从巨大芽孢杆菌中提取分离P450_(BM-3) | 第30页 |
| ·从重组大肠杆菌提取分离P450_(BM-3) | 第30-31页 |
| ·立论根据与研究思路 | 第31-33页 |
| 第三章 P450_(BM-3)的质粒转化与发酵 | 第33-44页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-35页 |
| ·材料与仪器 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞的制备和质粒转化 | 第34-35页 |
| ·菌种保存 | 第35页 |
| ·发酵培养 | 第35页 |
| ·实验结果与讨论 | 第35-43页 |
| ·发酵培养的生长曲线 | 第35-36页 |
| ·发酵过程中pH值的变化曲线 | 第36-37页 |
| ·Amp对菌体生长的影响 | 第37页 |
| ·装液量对发酵的影响 | 第37-38页 |
| ·接种量对发酵的影响 | 第38-39页 |
| ·诱导时机的确定 | 第39-40页 |
| ·诱导时间的确定 | 第40-41页 |
| ·添加FeCl_3对P450_(BM-3)表达的影响 | 第41-42页 |
| ·质粒稳定性实验 | 第42页 |
| ·P450_(BM-3)波长扫描图 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 硫酸铵分级沉淀以及凝胶过滤分离P450_(BM-3) | 第44-55页 |
| ·前言 | 第44页 |
| ·材料与方法 | 第44-48页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·实验仪器 | 第44页 |
| ·缓冲液配制方法 | 第44-45页 |
| ·蛋白质浓度测定方法 | 第45-46页 |
| ·蛋白质纯度鉴定方法 | 第46-47页 |
| ·P450_(BM-3)含量及酶活测定方法 | 第47页 |
| ·分离方法 | 第47-48页 |
| ·实验结果与讨论 | 第48-54页 |
| ·硫酸铵分级沉淀P450_(BM-3) | 第48-50页 |
| ·凝胶过滤分离P450_(BM-3) | 第50-53页 |
| ·硫酸铵沉淀-凝胶过滤层析的纯化工艺 | 第53-54页 |
| ·本章小结 | 第54-55页 |
| 第五章 离子交换-凝胶过滤层析法分离P450_(BM-3) | 第55-66页 |
| ·前言 | 第55页 |
| ·材料和方法 | 第55-56页 |
| ·试剂与仪器 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-65页 |
| ·pH值对DEAE-SepharoseFF吸附P450_(BM-3)的影响 | 第56-57页 |
| ·上样量对DEAE-Sepharose FF吸附P450_(BM-3)的影响 | 第57-59页 |
| ·次洗脱对DEAE-SepharoseFF吸附P450_(BM-3)的影响 | 第59-61页 |
| ·Resource Q介质分离P450_(BM-3) | 第61-63页 |
| ·ANX介质分离P450_(BM-3) | 第63-64页 |
| ·离子交换-凝胶层析组合使用的分离工艺 | 第64-65页 |
| ·本章小结 | 第65-66页 |
| 第六章 以疏水层析为主的纯化P450_(BM-3)工艺 | 第66-74页 |
| ·前言 | 第66页 |
| ·材料与方法 | 第66-67页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·实验仪器 | 第66-67页 |
| ·实验方案 | 第67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-73页 |
| ·介质的选择 | 第67-68页 |
| ·离子强度的选择 | 第68-69页 |
| ·不同洗脱梯度的比较 | 第69-70页 |
| ·不同流速洗脱的比较 | 第70-71页 |
| ·Phenyl Sepharose~(TM) High Performance分离P450_(BM-3) | 第71-72页 |
| ·以疏水层析为主的纯化P450_(BM-3)工艺 | 第72-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 结论与建议 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第82页 |
