| 第一章 绪论 | 第1-23页 |
| 1 引言及文献综述 | 第11-20页 |
| ·PPO酶学特点 | 第11页 |
| ·PPO的细胞定位和组织定位 | 第11-12页 |
| ·PPO引起组织褐化的生理机制和生物发生 | 第12-13页 |
| ·PPO的生理功能 | 第13-15页 |
| ·PPO对植物颜色的影响 | 第13页 |
| ·PPO在植物组织内的活性表现及对组织的影响 | 第13-14页 |
| ·PPO与植物抗病性的关系 | 第14-15页 |
| ·PPO与植物体生理活性物质的关系 | 第15页 |
| ·PPO的其他功能 | 第15页 |
| ·植物多酚氧化酶的生物发生 | 第15页 |
| ·PPO克隆、鉴定及加工 | 第15-17页 |
| ·PPO克隆 | 第15-16页 |
| ·PPO鉴定 | 第16-17页 |
| ·PPO加工 | 第17页 |
| ·PPO的时空表达 | 第17-18页 |
| ·植物PPO的修饰表达 | 第18页 |
| ·组织损伤引起酶褐化的控制方法 | 第18-20页 |
| ·抑制PPO活性 | 第18-19页 |
| ·马铃薯酶促褐化的控制途径 | 第19-20页 |
| 2 本研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 3 本研究的技术路线 | 第21-23页 |
| 第二章 加工型马铃薯生长期间多酚氧化酶活性的动态变化 | 第23-32页 |
| 1 材料与方法 | 第23-24页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-24页 |
| ·实验材料的大田种植 | 第23-24页 |
| ·取样方法 | 第24页 |
| ·粗酶液制备 | 第24页 |
| ·比色液制备 | 第24页 |
| ·比色 | 第24页 |
| 2 实验结果与分析 | 第24-30页 |
| ·马铃薯叶片PPO活性的变化 | 第24-26页 |
| ·不同品种叶片PPO活性的差异 | 第24页 |
| ·生长期马铃薯叶片PPO活性变化规律 | 第24-25页 |
| ·马铃薯植株上部叶片与下部叶片PPO活性的差异 | 第25页 |
| ·病叶与正常叶片PPO活性的差异 | 第25-26页 |
| ·马铃薯块茎PPO活性的变化 | 第26-28页 |
| ·不同品种马铃薯块茎PPO活性的差异 | 第26页 |
| ·块茎膨大过程中PPO活性的动态变化规律 | 第26-27页 |
| ·块茎不同部位PPO活性的动态变化 | 第27-28页 |
| ·马铃薯块茎与匍匐茎PPO活性的差别 | 第28页 |
| ·贮藏待播块茎与块茎芽PPO活性差异 | 第28页 |
| ·匍匐茎PPO活性的变化 | 第28-29页 |
| ·不同品种马铃薯匍匐茎PPO活性的差异 | 第28-29页 |
| ·匍匐茎PPO活性的动态变化 | 第29页 |
| ·花及花药PPO活性的变化 | 第29-30页 |
| ·花药、花蕾与花瓣PPO活性的差异 | 第29页 |
| ·不同品种花药PPO活性的动态变化 | 第29-30页 |
| ·不同组织器官PPO活性的差别 | 第30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| ·关于品种、组织及组织不同部位PPO活性的差异 | 第30-31页 |
| ·关于马铃薯生长过程中PPO活性的动态变化及其规律性 | 第31页 |
| ·关于病叶与正常叶PPO活性的差异 | 第31-32页 |
| 第三章 外界条件对马铃薯PPO活性的影响 | 第32-42页 |
| 1 材料与方法 | 第32-33页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·试管苗 | 第32页 |
| ·愈伤组织 | 第32-33页 |
| ·块茎 | 第33页 |
| ·材料处理 | 第33页 |
| ·PPO活性测定 | 第33页 |
| ·取样 | 第33页 |
| ·粗酶液的制备 | 第33页 |
| ·比色液制备与比色 | 第33页 |
| 2 实验结果与分析 | 第33-40页 |
| ·pH对马铃薯粗酶液PPO活性的影响 | 第33-34页 |
| ·pH对马铃薯块茎芽PPO活性的影响 | 第33页 |
| ·pH对马铃薯试管苗PPO活性的影响 | 第33-34页 |
| ·外界条件对马铃薯活体组织PPO活性的影响 | 第34-35页 |
| ·pH对马铃薯试管苗和愈伤组织PPO活性的影响 | 第34-35页 |
| ·温度对马铃薯试管苗、贮藏块茎PPO活性的影响 | 第35页 |
| ·褐化抑制剂对马铃薯PPO活性的影响 | 第35-40页 |
| ·Vc对马铃薯PPO活性的影响 | 第35-36页 |
| ·AgNO3对马铃薯PPO活性的影响 | 第36-37页 |
| ·L-半胱氨酸对马铃薯PPO活性的影响 | 第37-38页 |
| ·柠檬酸对马铃薯PPO活性的影响 | 第38-39页 |
| ·硼酸对马铃薯PPO活性的影响 | 第39页 |
| ·偏重亚硫酸钠对马铃薯PPO活性的影响 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| ·关于pH与PPO活性的关系 | 第40-41页 |
| ·关于温度与PPO活性的关系 | 第41页 |
| ·关于褐化抑制剂抑制PPO活性的效果 | 第41-42页 |
| 第四章 马铃薯多酚氧化酶基因的克隆、检测和测序 | 第42-55页 |
| 1 材料与方法 | 第42-47页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·质粒及菌种 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·植物总DNA提取 | 第42-43页 |
| ·POT32基因的PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·重组体的构建和向宿主细胞的导入 | 第44-45页 |
| ·重组体的筛选和鉴定 | 第45-47页 |
| ·重组体DNA的测序 | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-54页 |
| ·马铃薯试管苗总DNA提取 | 第47页 |
| ·目的片段PCR的扩增条件 | 第47页 |
| ·重组子的检测和阳性克隆筛选 | 第47-48页 |
| ·β-半乳糖苷酶基因插入失活检测 | 第47页 |
| ·滞后质粒的筛选 | 第47页 |
| ·酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·DNA片段的序列分析 | 第48-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| ·关于马铃薯试管苗总DNA的提取 | 第54页 |
| ·关于PCR引物的设计 | 第54-55页 |
| 第五章 马铃薯PPO反义基因植物表达载体的构建及转化农杆菌 | 第55-61页 |
| 1 材料方法 | 第55-58页 |
| ·材料与试剂 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-58页 |
| ·表达载体质粒的酶切和PC3载体的构建 | 第56页 |
| ·反义基因表达载体转化农杆菌 | 第56-57页 |
| ·农杆菌整合外源基因的PCR鉴定 | 第57-58页 |
| 2 结果分析 | 第58-59页 |
| ·多酚氧化酶反义基因植物表达载体的构建 | 第58页 |
| ·反义基因植物表达载体的酶切鉴定 | 第58-59页 |
| ·反义基因植物表达载体农杆菌工程菌的获得和鉴定 | 第59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| ·关于ＰＰＯ反义基因植物表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·关于反义基因片段大小与抑制基因表达的关系 | 第60页 |
| ·关于反义基因表达载体转化农杆菌的鉴定 | 第60-61页 |
| 第六章 PPO反义基因植物表达载体转化马铃薯的研究 | 第61-73页 |
| 1 材料与方法 | 第61-65页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-65页 |
| ·马铃薯基因转化受体材料 | 第61-62页 |
| ·培养基类型 | 第62页 |
| ·受体材料Kan敏感性实验 | 第62页 |
| ·农杆菌工程菌菌液的准备 | 第62页 |
| ·农杆菌工程菌转化马铃薯的程序 | 第62页 |
| ·外植体的继代培养 | 第62页 |
| ·转化植株的生根和继代培养 | 第62页 |
| ·转化植株的PCR鉴定 | 第62-63页 |
| ·转化植株总DNA的Southern杂交 | 第63-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-71页 |
| ·预培养时间对转化频率的影响 | 第65页 |
| ·侵染时间与抗性愈伤组织出愈率及抑菌的关系 | 第65-67页 |
| ·共培养时间与出愈率与污染率的关系 | 第67页 |
| ·蔗糖浓度对侵染的外植体出愈率及污染率的影响 | 第67-68页 |
| ·受体材料的Kan敏感性测验 | 第68-69页 |
| ·不同外植体材料的转化效率 | 第69-70页 |
| ·转化植株的PCR鉴定 | 第70页 |
| ·转化植株的Southern 杂交鉴定 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-73页 |
| 第七章 转化植株及抗性愈伤组织PPO的生理活性检测 | 第73-78页 |
| 1 材料与方法 | 第73页 |
| ·植物材料 | 第73页 |
| ·取样 | 第73页 |
| ·比色方法 | 第73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-77页 |
| ·“甘单花9号”抗性愈伤组织PPO活性的鉴定 | 第73-74页 |
| ·Norvalley、“甘单花9号”转化植株试管微型薯PPO活性的鉴定 | 第74页 |
| ·转基因马铃薯叶片PPO活性的变化 | 第74-75页 |
| ·转基因植株叶片的PPO同工酶分析 | 第75-76页 |
| ·转基因马铃薯微型薯PPO活性的表现 | 第76页 |
| ·微型薯PPO同工酶的变异 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-78页 |
| 第八章 讨论与结论 | 第78-82页 |
| 1 讨论 | 第78-80页 |
| 2 结论 | 第80-82页 |
| 图版Ⅰ | 第82-83页 |
| 图版Ⅱ | 第83-85页 |
| 图版说明 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 致 谢 | 第92-93页 |
| 博士期间已发表的论文 | 第93页 |
