| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-16页 |
| ·荧光素酶简介 | 第7页 |
| ·荧光素酶的种类 | 第7页 |
| ·荧光素酶的结构 | 第7-8页 |
| ·细菌荧光素酶的结构 | 第7-8页 |
| ·萤火虫荧光素酶的结构 | 第8页 |
| ·荧光素酶催化发光的原理 | 第8-9页 |
| ·细菌荧光素酶 | 第8页 |
| ·萤火虫荧光素酶 | 第8-9页 |
| ·荧光素 | 第9-11页 |
| ·荧光素种类 | 第9页 |
| ·荧光素的结构、性质与合成 | 第9-11页 |
| ·荧光素酶的制备与生产 | 第11-12页 |
| ·荧光素酶的应用 | 第12-15页 |
| ·作为报告基因检测系统 | 第12页 |
| ·在生命科学研究中的应用 | 第12-13页 |
| ·研究蛋白质之间作用 | 第13页 |
| ·用于RNA 干扰研究 | 第13页 |
| ·在细胞分析中的应用 | 第13-14页 |
| ·微生物检测 | 第14页 |
| ·在医学上的应用 | 第14-15页 |
| ·本论文的研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 荧光素酶编码基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第16-25页 |
| ·引言 | 第16页 |
| ·材料与方法 | 第16-20页 |
| ·菌株和载体 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·培养基及培养条件 | 第16-17页 |
| ·工具酶及其他试剂 | 第17-18页 |
| ·萤火虫荧光素酶基因的克隆 | 第18页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第18页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建和编码荧光素酶基因的诱导表达 | 第19页 |
| ·重组菌全细胞蛋白SDS-PAGE 分析 | 第19页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第19-20页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第20页 |
| ·结果与讨论 | 第20-23页 |
| ·luc DNA 的克隆及分析 | 第20页 |
| ·含萤火虫荧光素酶基因luc 的重组载体pQE30-luc 的构建 | 第20-21页 |
| ·luc 基因在E. coli M15 中表达 | 第21-22页 |
| ·重组大肠杆菌全细胞蛋白SDS-PAGE 电泳分析 | 第22-23页 |
| ·萤火虫荧光素酶酶活力测定 | 第23页 |
| ·重组大肠杆菌质粒稳定性分析 | 第23页 |
| ·本章小结 | 第23-25页 |
| 第三章 萤火虫荧光素酶的纯化及酶学性质的初步研究 | 第25-35页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·材料与方法 | 第25-27页 |
| ·菌株 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·培养基及培养条件 | 第25页 |
| ·萤火虫荧光素酶的纯化 | 第25-26页 |
| ·萤火虫荧光素酶酶活力测定 | 第26页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第26页 |
| ·荧光素酶的酶学性质研究 | 第26-27页 |
| ·不同的酶保存液对荧光素酶酶活稳定性的影响 | 第27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-34页 |
| ·luc 基因在E. coli M15 中表达与重组蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| ·萤火虫荧光素酶的酶学性质 | 第28-31页 |
| ·不同的酶保存液对荧光素酶酶活稳定性的影响 | 第31-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第四章 M15/pQE30-luc 产 LUC 发酵条件的优化 | 第35-44页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·材料和方法 | 第35-37页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·培养方法 | 第36页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第36页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第36页 |
| ·发酵条件的优化及正交实验 | 第36-37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-43页 |
| ·初始pH 的影响 | 第37页 |
| ·不同IPTG 浓度的影响 | 第37-38页 |
| ·IPTG 诱导时间的影响 | 第38页 |
| ·不同浓度的Mg~(2+)的影响 | 第38-39页 |
| ·不同接种量的影响 | 第39-40页 |
| ·不同装液量的影响 | 第40页 |
| ·不同转速的影响 | 第40-41页 |
| ·正交实验结果 | 第41-42页 |
| ·5L 发酵罐上重组菌的发酵特征 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 主要结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
