| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| ·研究背景 | 第8-11页 |
| ·人白介素-11 的发现 | 第8页 |
| ·IL-11 的分子生物学特性 | 第8-9页 |
| ·IL-11 的生物学作用 | 第9-10页 |
| ·IL-11 的临床作用 | 第10-11页 |
| ·人血清白蛋白的研究 | 第11-12页 |
| ·人血清白蛋白的分子生物学特性 | 第11页 |
| ·重组人血清白蛋白在药学中的应用 | 第11-12页 |
| ·重组人血清白蛋白的表达系统 | 第12页 |
| ·长效药物研究 | 第12-14页 |
| ·我国生物技术药物研究概况 | 第12页 |
| ·国际生物技术药物概况 | 第12-13页 |
| ·长效药物研究途径 | 第13-14页 |
| ·长效药物应用前景 | 第14页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第14-16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的特点 | 第14页 |
| ·表达型巴斯德毕赤酵母宿主菌株 | 第14页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达载体 | 第14-15页 |
| ·影响外源蛋白表达的主要因素 | 第15-16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的应用前景 | 第16页 |
| ·本课题的研究思路与内容 | 第16-17页 |
| ·课题研究思路 | 第16页 |
| ·研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 人血清白蛋白和白介素-11 编码基因融合载体的构建 | 第17-26页 |
| ·引言 | 第17页 |
| ·材料与方法 | 第17-21页 |
| ·人胎肺细胞、菌株与质粒 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| ·工具酶、试剂和缓冲液 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·XL-1-Blue 感受态细胞的制备以及转化 | 第18-19页 |
| ·原代胎肺成纤维细胞的制备及诱导 | 第19页 |
| ·总RNA 的提取及RT-PCR 合成IL-11cDNA | 第19-20页 |
| ·IL-11 编码基因的克隆 | 第20页 |
| ·获得编码HSA-IL-11 的基因及其克隆 | 第20页 |
| ·重组表达质粒pPH111 的构建及其序列测定 | 第20-21页 |
| ·结果与讨论 | 第21-25页 |
| ·融合蛋白HSA-IL-11 表达载体pPH111 构建 | 第21-22页 |
| ·含有IL-11cDNA 序列的重组载体pMD19/IL-11 的构建 | 第22-23页 |
| ·融合基因HSA-IL-11 的拼接 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pBlue/HI 的构建 | 第24页 |
| ·表达质粒pPH111 的构建 | 第24-25页 |
| ·本章小结 | 第25-26页 |
| 第三章 重组酵母P. PASTORIS G5115/PPH111 的构建 | 第26-35页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·材料与方法 | 第26-30页 |
| ·菌株、质粒和培养基 | 第26页 |
| ·工具酶、试剂与缓冲液 | 第26-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·线性化融合表达质粒pPH111 和pPIC9K | 第28页 |
| ·重组菌P. pastoris GS115/pPH111 的构建 | 第28-29页 |
| ·高拷贝重组子P. pastoris GS115/pPH111 的筛选 | 第29页 |
| ·重组子P. pastoris GS115/pPH111 的PCR 鉴定 | 第29页 |
| ·重组子的Mut 表型鉴定 | 第29页 |
| ·重组子P. pastoris GS115/pPH111 的诱导表达 | 第29页 |
| ·表达产物的Western-blot 鉴定 | 第29-30页 |
| ·融合蛋白测定方法 | 第30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-33页 |
| ·重组毕赤酵母P. pastoris GS115/pPH111 的构建与筛选 | 第30-31页 |
| ·重组毕赤酵母P. pastoris GS115/pPH111 的鉴定 | 第31页 |
| ·重组菌的Mut 表型鉴定 | 第31页 |
| ·高表达P. pastoris GS115/pPH111 的筛选 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白的Western-blot 鉴定 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第四章 P. PASTORIS GS115/PPH111 诱导条件的初步优化 | 第35-43页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·材料与方法 | 第35-36页 |
| ·菌种与细胞 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·摇瓶诱导条件的优化 | 第36页 |
| ·融合蛋白HSA-IL-11 的测定 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-42页 |
| ·菌体生长阶段溶氧对表达的影响 | 第36-37页 |
| ·甲醇浓度对表达的影响 | 第37-38页 |
| ·pH 对表达的影响 | 第38页 |
| ·诱导时间对表达的影响 | 第38-39页 |
| ·诱导温度对表达的影响 | 第39页 |
| ·初步优化后融合蛋白的表达 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白的生物活性 | 第40-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第五章 主要结论 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录： 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
