| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 绪论 | 第8-14页 |
| ·DNA双链断裂损伤修复NHEJ途径概述 | 第8-9页 |
| ·XRCC4类似因子(XLF)研究概况 | 第9-12页 |
| ·XLF的发现及功能鉴定 | 第9-11页 |
| ·XLF作用机制研究 | 第11-12页 |
| ·Werner Syndrome(WRN)研究简况 | 第12页 |
| ·本实验的研究内容、目的及意义 | 第12-14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-28页 |
| ·实验材料 | 第14-19页 |
| ·实验方法 | 第19-28页 |
| ·贴壁细胞传代培养 | 第19页 |
| ·siRNA转染贴壁细胞(以6孔板细胞转染为例) | 第19-20页 |
| ·质粒瞬时转染U2OS细胞(以6孔板细胞转染为例) | 第20页 |
| ·质粒稳定转染U2OS细胞 | 第20-21页 |
| ·SDS-PAGE及Western blot检测 | 第21-22页 |
| ·启动子活性检测即双荧光报告基因分析 | 第22页 |
| ·Cell Proliferation Assay(本论文中特指药物敏感性检测) | 第22页 |
| ·免疫荧光实验(IF) | 第22-23页 |
| ·染色体免疫沉淀(Ch-PI) | 第23-25页 |
| ·基因工程操作 | 第25-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-45页 |
| ·XLF促进复制依赖型DSB损伤的修复 | 第28-32页 |
| ·抑制XLF表达导致内源DSB水平增加 | 第28-29页 |
| ·XLF促进CPT诱导的复制依赖型DSB损伤的修复 | 第29-31页 |
| ·siXLF-1特异性抑制XLF的表达,导致DSB水平升高 | 第31-32页 |
| ·抑制XLF的表达增加了细胞对复制依赖型DNA损伤药物CPT的敏感性 | 第32-35页 |
| ·XLF表达的调控机制研究 | 第35-45页 |
| ·WRN对XLF蛋白水平的影响 | 第35-38页 |
| ·XLF对其自身蛋白水平的影响 | 第38页 |
| ·WRN与XLF对XLF基因启动子活性的影响 | 第38-45页 |
| ·含XLF基因启动子的荧光素酶报告基因载体pGL3-XLFpr构建 | 第38-39页 |
| ·XLFpr(-596～+169)活性验证 | 第39-40页 |
| ·WRN或XLF的敲低对XLF基因启动子活性的影响 | 第40页 |
| ·WRN、XLF的过度表达对XLF基因启动子活性的影响 | 第40-43页 |
| ·WRN、XLF与XLF基因启动子区相互作用 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| ·XLF的DSB损伤修复功能的鉴定 | 第45-46页 |
| ·WRN和XLF自身对XLF的转录调控 | 第46-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 6 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
