| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| ·嗜热菌 | 第10-11页 |
| ·嗜热酶 | 第11-16页 |
| ·影响嗜热酶热稳定性的因素 | 第11-14页 |
| ·嗜热酶自身的结构特点 | 第11-14页 |
| ·嗜热酶结构以外的因素 | 第14页 |
| ·嗜热酶的应用 | 第14-16页 |
| ·食品 | 第14-15页 |
| ·制药 | 第15页 |
| ·环保 | 第15页 |
| ·其他 | 第15-16页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体 | 第16-21页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的结构及功能 | 第16-18页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的反应机制 | 第18-19页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的活性调节 | 第19-21页 |
| ·硕士论文立体依据与研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-40页 |
| ·实验材料 | 第22-27页 |
| ·细菌菌株与质粒载体 | 第22页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第22-23页 |
| ·实验仪器 | 第23-24页 |
| ·主要溶液 | 第24-27页 |
| ·实验方法 | 第27-40页 |
| ·实验技术路线 | 第27-28页 |
| ·Thermus thermophilus HB8基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分析 | 第28-29页 |
| ·PCR技术扩增dlt基因 | 第29-30页 |
| ·目的基因片段的回收 | 第30-32页 |
| ·回收产物与pGEM-T载体连接 | 第32页 |
| ·制备感受态细胞(CaCl_2法) | 第32页 |
| ·重组质粒的导入 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第33-35页 |
| ·提取质粒 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pGEM-dlt的双酶切鉴定 | 第34页 |
| ·序列测定 | 第34-35页 |
| ·表达载体构建 | 第35页 |
| ·重组蛋白的亲和层析纯化 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| ·蛋白质溶液的透析 | 第37页 |
| ·蛋白质溶液的浓缩 | 第37-38页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第38页 |
| ·蛋白的酶动力学测定 | 第38-40页 |
| 第三章 结果与分析 | 第40-50页 |
| ·dlt基因克隆载体和表达载体的构建 | 第40-44页 |
| ·Thermus thermophilus HB8基因组DNA的提取 | 第40页 |
| ·PCR扩增dlt基因 | 第40-41页 |
| ·目的基因片段dlt的胶纯化回收 | 第41页 |
| ·TA克隆、转化与蓝白筛选 | 第41-42页 |
| ·克隆载体pGEM-dlt双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·基因序列测定 | 第43页 |
| ·表达载体pTrcHisC-dlt的双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第44-45页 |
| ·E2的酶动力学 | 第45-50页 |
| ·E2的Km测定 | 第45-46页 |
| ·E2的最适反应温度测定 | 第46-47页 |
| ·E2的反应活化能 | 第47-48页 |
| ·E2的最适反应pH测定 | 第48-50页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第50-54页 |
| ·dlt基因克隆表达及蛋白纯化 | 第50-51页 |
| ·dlt基因的克隆表达 | 第50-51页 |
| ·蛋白纯化 | 第51页 |
| ·酶动力学 | 第51-53页 |
| ·Km测定 | 第51-52页 |
| ·最适温度 | 第52页 |
| ·最适pH | 第52-53页 |
| ·展望 | 第53-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61页 |