| 摘要 | 第6-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-41页 |
| 1 七种猪呼吸道类和繁殖障碍类病毒概述 | 第16-27页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒 | 第16-18页 |
| 1.2 猪圆环病毒2型 | 第18-19页 |
| 1.3 猪细小病毒 | 第19-21页 |
| 1.4 猪伪狂犬病毒 | 第21-22页 |
| 1.5 猪流感病毒 | 第22-24页 |
| 1.6 猪日本乙型脑炎病毒 | 第24-25页 |
| 1.7 猪瘟病毒 | 第25-27页 |
| 2 猪呼吸道类和繁殖障碍类病毒分子生物学检测方法研究进展 | 第27-40页 |
| 2.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学检测方法研究进展 | 第28-30页 |
| 2.2 猪圆环病毒2型的分子生物学检测方法研究进展 | 第30-31页 |
| 2.3 猪细小病毒的分子生物学检测方法研究进展 | 第31-33页 |
| 2.4 猪伪狂犬病毒的分子生物学检测方法研究进展 | 第33-35页 |
| 2.5 猪流感病毒的分子生物学检测方法研究进展 | 第35-37页 |
| 2.6 猪日本乙型脑炎病毒的分子生物学检测方法研究进展 | 第37-38页 |
| 2.7 猪瘟病毒的分子生物学检测方法研究进展 | 第38-40页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第40-41页 |
| 第二章 PRRSV、PCV2、PPV、PRV、SIV、JEV及 CSFV七重PCR检测方法的建立及应用研究 | 第41-69页 |
| 1 材料 | 第41-45页 |
| 1.1 病毒及细胞 | 第41-42页 |
| 1.2 病料来源 | 第42页 |
| 1.3 主要试剂 | 第42-43页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第43页 |
| 1.5 主要溶液的配制 | 第43-45页 |
| 2 方法 | 第45-50页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第45页 |
| 2.2 细胞的复苏及病毒的增殖 | 第45-46页 |
| 2.3 病毒核酸的提取及c DNA模板的制备 | 第46-47页 |
| 2.4 病毒核酸的PCR扩增 | 第47页 |
| 2.5 PRRSV、PCV2、PPV、PRV、SIV、JEV和 CSFV目的基因的鉴定 | 第47-48页 |
| 2.5.1 目的基因的回收纯化 | 第47页 |
| 2.5.2 目的基因与p MD19-T载体的连接 | 第47页 |
| 2.5.3 重组质粒的转化 | 第47-48页 |
| 2.5.4 重组质粒的抽提及鉴定 | 第48页 |
| 2.6 单一病毒PCR检测方法的建立 | 第48-49页 |
| 2.6.1 单一病毒PCR反应体系的建立 | 第48页 |
| 2.6.2 单一病毒PCR反应条件的优化 | 第48-49页 |
| 2.6.3 单一病毒的PCR敏感性试验 | 第49页 |
| 2.7 七重PCR检测方法的建立 | 第49-50页 |
| 2.7.1 七重PCR反应体系的建立 | 第49页 |
| 2.7.2 七重PCR反应退火温度的优化 | 第49页 |
| 2.7.3 七重PCR敏感性试验 | 第49页 |
| 2.7.4 七重PCR特异性试验 | 第49-50页 |
| 2.7.5 七重PCR重复性试验 | 第50页 |
| 2.7.6 七重PCR试剂盒的组装 | 第50页 |
| 2.7.7 七重PCR对临床病料的检测 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-66页 |
| 3.1 病毒的增殖 | 第50-53页 |
| 3.1.1 PRV的增殖 | 第50-51页 |
| 3.1.2 PRRSV的增殖 | 第51-52页 |
| 3.1.3 JEV的增殖 | 第52页 |
| 3.1.4 SIV的增殖 | 第52-53页 |
| 3.1.5 PPV、PCV2、CSFV的增殖 | 第53页 |
| 3.2 单一病毒PCR检测方法的建立 | 第53-60页 |
| 3.2.1 单一病毒的PCR扩增及鉴定 | 第53页 |
| 3.2.2 单一病毒的PCR反应体系的建立 | 第53-54页 |
| 3.2.3 单一病毒的PCR反应条件的优化 | 第54-57页 |
| 3.2.4 单一病毒PCR敏感性检测 | 第57-60页 |
| 3.3 七重PCR检测方法的建立 | 第60-66页 |
| 3.3.1 七重PCR反应体系的建立 | 第60-61页 |
| 3.3.2 七重PCR反应退火温度的优化 | 第61-62页 |
| 3.3.3 七重PCR敏感性试验 | 第62页 |
| 3.3.4 七重PCR特异性试验 | 第62-63页 |
| 3.3.5 七重PCR重复性试验 | 第63-64页 |
| 3.3.6 七重PCR试剂盒的组装 | 第64-65页 |
| 3.3.7 七重PCR对临床病料的检测 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 第三章 规模化猪场猪呼吸道类和繁殖障碍类病毒部分流行毒株遗传变异研究 | 第69-94页 |
| 1 材料 | 第70-71页 |
| 1.1 病料来源 | 第70页 |
| 1.2 主要试剂 | 第70-71页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第71页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第71页 |
| 2 方法 | 第71-73页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第71-72页 |
| 2.2 PRV、PCV2、CSFV、PRRSV、JEV相关基因的克隆和遗传变异分析 | 第72-73页 |
| 3 结果 | 第73-87页 |
| 3.1 PRV gE基因的克隆和遗传变异分析 | 第73-76页 |
| 3.2 PCV2 全基因的基因的克隆和遗传变异分析 | 第76-78页 |
| 3.3 CSFV E2 基因的克隆和遗传变异分析 | 第78-81页 |
| 3.4 PRRSV ORF5及Nsp2 基因的克隆和遗传变异分析 | 第81-85页 |
| 3.5 JEV E基因的的克隆和遗传变异分析 | 第85-87页 |
| 4 讨论 | 第87-93页 |
| 4.1 PRV的遗传变异情况 | 第87-88页 |
| 4.2 PCV2 的遗传变异情况 | 第88-89页 |
| 4.3 CSFV的遗传变异情况 | 第89-90页 |
| 4.4 PRRSV的遗传变异情况 | 第90-92页 |
| 4.5 JEV的遗传变异情况 | 第92-93页 |
| 5 结论 | 第93-94页 |
| 主要参考文献 | 第94-103页 |
| 附录一 攻读硕士学位期间参与发表的论文 | 第103-105页 |
| 附录二 本文用到的部分英文缩写及含义说明 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
