| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 引言 | 第7-15页 |
| ·类脂A和内毒素 | 第7-8页 |
| ·内毒素的结构 | 第7页 |
| ·内毒素的功能 | 第7-8页 |
| ·类脂A及LPS的合成 | 第8-9页 |
| ·类脂A的修饰 | 第9-13页 |
| ·类脂A结构修饰的调控 | 第9-10页 |
| ·类脂A脂肪酸链的修饰 | 第10-12页 |
| ·类脂A磷酸基团的修饰 | 第12-13页 |
| ·类脂A结构中磷酸基团和脂肪酸链的相互影响 | 第13页 |
| ·立题背景和意义 | 第13-14页 |
| ·课题研究内容和研究目标 | 第14-15页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第15-26页 |
| ·实验材料 | 第15-17页 |
| ·菌株、质粒、引物和细菌培养 | 第15-16页 |
| ·工具酶和试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·分子生物学基本操作 | 第17-19页 |
| ·质粒及基因组DNA提取 | 第17页 |
| ·PCR反应体系和条件 | 第17页 |
| ·质粒和PCR产物的酶切连接 | 第17-19页 |
| ·载体依赖的大肠杆菌类脂A结构的定向改造 | 第19-20页 |
| ·类脂A结构修饰基因表达载体的构建 | 第19页 |
| ·类脂A的提取及TLC分析 | 第19-20页 |
| ·类脂A结构的ESI/MS分析 | 第20页 |
| ·菌株类脂A结构修饰优化试验 | 第20页 |
| ·大肠杆菌单磷酸类脂A突变株的构建及染色体整合表达方法的建立 | 第20-23页 |
| ·lpxE整合敲入片段的构建 | 第21-22页 |
| ·敲除感受态的制备及电转化 | 第22页 |
| ·突变株验证及抗性标记的去除 | 第22页 |
| ·类脂A提取及结构分析 | 第22页 |
| ·CW001生长状态及外源基因lpxE的稳定性的研究 | 第22页 |
| ·报告基因cat的敲入表达及染色体整合表达方法的建立 | 第22-23页 |
| ·不依赖于载体的大肠杆菌类脂A结构的定向改造 | 第23-26页 |
| ·pWSK29-QpagL-QlpxE的构建及表达分析 | 第23页 |
| ·pWSK29-pagL-lpxE的构建及染色体整合表达 | 第23页 |
| ·大肠杆菌pagP缺失突变株的构建 | 第23-25页 |
| ·pWSK29-P_(kan)-pagL-lpxE-pagP的构建及敲入表达分析 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-46页 |
| ·类脂A结构定向改造的初步研究 | 第26-30页 |
| ·PagL和PagP表达载体的构建 | 第26页 |
| ·PagL和PagP对类脂A结构的修饰 | 第26-28页 |
| ·PagL、LpxE和PagP的共表达表达及MPL的产生 | 第28-29页 |
| ·阶段小结 | 第29-30页 |
| ·类脂A结构修饰的优化 | 第30-34页 |
| ·沙门氏菌pagP基因的表达及其对类脂A的结构修饰 | 第30-31页 |
| ·表达载体pBAD24对目的基因表达及类脂A结构修饰的研究 | 第31-32页 |
| ·目的基因表达的双启动子组成型改造及其对类脂A结构的修饰 | 第32-33页 |
| ·阶段小结 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌单磷酸类脂A突变株的构建及染色体整合表达方法的建立 | 第34-39页 |
| ·大肠杆菌MPLA突变株CW001的构建 | 第34-35页 |
| ·突变株CW001中类脂A结构的分析 | 第35页 |
| ·CW001生长曲线和lpxE的稳定性 | 第35-37页 |
| ·大肠杆菌染色体快速整合表达方法的建立 | 第37-39页 |
| ·阶段小结 | 第39页 |
| ·不依赖于载体的大肠杆菌类脂A结构的定向改造 | 第39-46页 |
| ·带有自身启动子的pagL和lpxE在大肠杆菌中的作用 | 第39-40页 |
| ·pagL和lpxE染色体整合表达突变株CW002的构建及其对类脂A结构的分析 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌pagP缺失突变株CW003的构建 | 第41-42页 |
| ·双启动子组成型突变株CW004的构建及其类脂A结构的分析 | 第42-44页 |
| ·阶段小结 | 第44-46页 |
| 第四章 结论与展望 | 第46-48页 |
| ·结论 | 第46页 |
| ·展望 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第55页 |
