| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 第一章 绪论 | 第17-29页 |
| 1.1 杆状病毒感染机制 | 第17-23页 |
| 1.1.1 什么是杆状病毒 | 第17页 |
| 1.1.2 杆状病毒的分类 | 第17-18页 |
| 1.1.3 杆状病毒的形态结构和感染周期 | 第18-20页 |
| 1.1.4 杆状病毒的感染周期 | 第20-22页 |
| 1.1.5 杆状病毒.服感染相关基因 | 第22-23页 |
| 1.2 杆状病毒的利用 | 第23-24页 |
| 1.3 整联蛋白 | 第24-25页 |
| 1.3.1 什么是整联蛋白 | 第24页 |
| 1.3.2 整联蛋白的研究现状 | 第24-25页 |
| 1.4 RACE技术在克隆cDNA中的应用 | 第25-26页 |
| 1.4.1 RACE的简介 | 第25页 |
| 1.4.2 RACE的原理 | 第25-26页 |
| 1.5 激光共聚焦显微镜的应用 | 第26-28页 |
| 1.5.1 激光共聚焦出现 | 第26-27页 |
| 1.5.2 激光共聚焦的工作原理 | 第27页 |
| 1.5.3 激光共聚焦显微镜的应用 | 第27-28页 |
| 1.6 课题研究意义 | 第28-29页 |
| 第二章 PIF-1 的 5'端全长的克隆及序列分析 | 第29-37页 |
| 2.1 前沿 | 第29页 |
| 2.2 实验试剂与材料 | 第29页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第29页 |
| 2.2.2 实验材料 | 第29页 |
| 2.3 实验步骤 | 第29-31页 |
| 2.3.1 样品的制备 | 第29页 |
| 2.3.2 RNA的提取 | 第29页 |
| 2.3.3 pif-1 的 5'RACE | 第29-30页 |
| 2.3.4 S.N.A.P.柱纯化cDNA | 第30页 |
| 3.3.5 cDNA的加尾 | 第30页 |
| 2.3.6 dC-tailed cDNA的PCR | 第30-31页 |
| 2.3.7 产物的克隆 | 第31页 |
| 2.3.8 序列的分析 | 第31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-35页 |
| 2.4.1 RNA的提取 | 第31页 |
| 2.4.2 dC-tailed cDNA的PCR | 第31-32页 |
| 2.4.3 pif-1 全长序列的分析 | 第32-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 家蚕杆状病毒PIF-1 的原核表达及抗体制备 | 第37-47页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料与试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.1 实验材料准备 | 第37页 |
| 3.2.2 实验试剂配制 | 第37-38页 |
| 3.3 原核融合载体的构建 | 第38-41页 |
| 3.4 目的蛋白的获得 | 第41-42页 |
| 3.4.1 目的蛋白的表达及鉴定 | 第41页 |
| 3.4.2 目的蛋白的大量表达 | 第41页 |
| 3.4.3 用尿素提取包涵体 | 第41-42页 |
| 3.5 抗体的制备及检测 | 第42-43页 |
| 3.5.1 免疫反应 | 第42页 |
| 3.5.2 Western-blot分析检测抗体的特异性 | 第42-43页 |
| 3.6 结果与分析 | 第43-45页 |
| 3.6.1 重组PIF-1 原核表达载体的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| 3.6.2 目的蛋白的表达鉴定 | 第44-45页 |
| 3.6.3 Western-blot检测抗体特异性 | 第45页 |
| 3.7 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 PIF-1 在细胞水平的时相表达分析 | 第47-53页 |
| 4.1 前沿 | 第47页 |
| 4.2 实验材料与准备 | 第47页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第47页 |
| 4.2.2 常用试剂配制 | 第47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-50页 |
| 4.3.1 样品的准备 | 第47页 |
| 4.3.2 家蚕细胞总RNA的提取和鉴定 | 第47-48页 |
| 4.3.3 RNA的纯化 | 第48-49页 |
| 4.3.4 反转录反应扩增cDNA第1链 | 第49页 |
| 4.3.5 Real-Time PCR方法 | 第49-50页 |
| 4.4 结果与分析 | 第50-52页 |
| 4.4.1 家蚕细胞总RNA的提取 | 第50-51页 |
| 4.4.2 Real-Time PCR的结果分析 | 第51页 |
| 4.4.3 pif-1 的表达分析 | 第51-52页 |
| 4.5 讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 亚细胞定位 | 第53-61页 |
| 5.1 前言 | 第53页 |
| 5.2 实验材料与试剂 | 第53-54页 |
| 5.2.1 材料与试剂 | 第53-54页 |
| 5.3 实验方法 | 第54-56页 |
| 5.3.1pIZ/V5-His-eGFP的构建 | 第54-55页 |
| 5.3.2 pIZ/V5-His- eGFP质粒的eGFP检测鉴定 | 第55页 |
| 5.3.3 pIZ/V5-His-pif1eGFP质粒的构建 | 第55-56页 |
| 5.3.4 pIZ/V5-His-pif1eGFP融合蛋白的表达鉴定 | 第56页 |
| 5.3.5 pif-1 蛋白的定位 | 第56页 |
| 5.4 结果与分析 | 第56-59页 |
| 5.4.1 pIZ/V5-His-eGFP的构建及鉴定 | 第56-57页 |
| 5.4.2 pIZ/V5-His-pif1eGFP真核表达载体的构建与鉴定 | 第57-58页 |
| 5.4.3 pif-1 的蛋白表达定位 | 第58-59页 |
| 5.5 讨论 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| 附录一：C2（pIZ/V5-His-pif1eGFP） | 第72-73页 |
| 附录二：D2（pIZ/V5-His-pif1eGFP+ BmNPV-SX-WT） | 第73-74页 |
| 附录三：本论文Marker图谱 | 第74-75页 |
| 攻读硕士期间参与发表的论文 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
