| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 环氧化物水解酶 | 第9-11页 |
| 1.1.1 EHs的分类 | 第9-10页 |
| 1.1.2 EHs的催化机理 | 第10-11页 |
| 1.1.3 EHs基因的挖掘 | 第11页 |
| 1.2 手性化合物 | 第11-12页 |
| 1.2.1 手性化合物简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 手性化合物的制备方法 | 第12页 |
| 1.3 对映归一性酶促水解的类型 | 第12-13页 |
| 1.3.1 单酶法 | 第12-13页 |
| 1.3.2 双酶法 | 第13页 |
| 1.3.3 酶-化学法 | 第13页 |
| 1.4 EHs催化反应的工艺优化 | 第13-15页 |
| 1.4.1 反应介质优化 | 第14-15页 |
| 1.4.2 固定化 | 第15页 |
| 1.5 EHs的分子改造 | 第15-16页 |
| 1.5.1 基于随机突变的定向进化 | 第15-16页 |
| 1.5.2 理性设计 | 第16页 |
| 1.6 本课题的立题依据及研究内容 | 第16-18页 |
| 1.6.1 立题依据 | 第16-17页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌株、质粒与工具酶 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 培养基与主要溶液的配制 | 第18-19页 |
| 2.1.4 引物 | 第19-20页 |
| 2.1.5 主要网站与软件 | 第20页 |
| 2.1.6 主要实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 菜豆环氧化物水解酶基因的克隆与表达 | 第21-27页 |
| 2.2.1 EHs一级结构分析 | 第21页 |
| 2.2.2 基因的克隆与表达 | 第21-24页 |
| 2.2.3 诱导表达条件优化 | 第24-25页 |
| 2.2.4 催化特性测定 | 第25页 |
| 2.2.5 目的蛋白纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.6 酶学性质测定 | 第26-27页 |
| 2.3 PvEH3的分子改造 | 第27-29页 |
| 2.3.1 突变位点的选择 | 第27页 |
| 2.3.2 突变体质粒的构建与筛选 | 第27-29页 |
| 2.3.3 突变体催化特性的分析 | 第29页 |
| 2.3.4 最优突变体的纯化与动力学参数的测定 | 第29页 |
| 2.4 PvEH3G170E/F187L/P237L的应用 | 第29-33页 |
| 2.4.1 单水相催化体系中的最大初始底物浓度 | 第29-30页 |
| 2.4.2 底物和产物浓度对酶活力的影响 | 第30-31页 |
| 2.4.3 有机溶剂的筛选 | 第31页 |
| 2.4.4 双相催化体系的优化 | 第31页 |
| 2.4.5 环氧苯乙烷类底物谱的测定 | 第31-33页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第33-52页 |
| 3.1 PvEH3基因的克隆与表达 | 第33-41页 |
| 3.1.1 PvEH3蛋白质结构分析 | 第33-34页 |
| 3.1.2 PvEH3基因的克隆与表达 | 第34-36页 |
| 3.1.3 E.coli/pveh3的诱导表达条件优化 | 第36-37页 |
| 3.1.4 催化特性分析 | 第37-39页 |
| 3.1.5 蛋白纯化与酶活力测定 | 第39-40页 |
| 3.1.6 酶学性质分析 | 第40-41页 |
| 3.2 PvEH3的定向改造 | 第41-46页 |
| 3.2.1 突变位点的选择 | 第41-42页 |
| 3.2.2 突变体质粒的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.3 单位点突变体催化特性的分析 | 第43-44页 |
| 3.2.4 双位点突变体催化特性的分析 | 第44页 |
| 3.2.5 三位点突变体催化特性的分析 | 第44-45页 |
| 3.2.6 PvEH3G170E/F187L/P237L区域选择性系数αS提高的初步分析 | 第45页 |
| 3.2.7 PvEH3G170E/F187L/P237L的分离纯化及酶活力测定 | 第45-46页 |
| 3.3 突变体PvEH3G170E/F187L/P237L的应用 | 第46-52页 |
| 3.3.1 单水相体系中PvEH3G170E/F187L/P237L催化的最大初始底物浓度 | 第46-47页 |
| 3.3.2 底物和产物浓度对PvEH3G170E/F187L/P237L酶促反应的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.3 双相体系的构建 | 第48-50页 |
| 3.3.4 环氧苯乙烷类底物谱分析 | 第50-52页 |
| 主要结论与展望 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第61页 |
