| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| 1.1 D-氨基酸的概况 | 第8-9页 |
| 1.1.1 D-氨基酸的简介 | 第8页 |
| 1.1.2 D-氨基酸的作用 | 第8-9页 |
| 1.1.3 D-氨基酸的检测方法 | 第9页 |
| 1.2 D-氨基酸脱氢酶的概况 | 第9-15页 |
| 1.2.1 D-氨基酸脱氢酶的简介 | 第9-10页 |
| 1.2.2 D-氨基酸脱氢酶的来源 | 第10页 |
| 1.2.3 D-氨基酸脱氢酶结构和催化机理 | 第10-12页 |
| 1.2.4 D-氨基酸脱氢酶的性质 | 第12页 |
| 1.2.5 D-氨基酸脱氢酶在生物体内的作用 | 第12-13页 |
| 1.2.6 D-氨基酸脱氢酶的应用 | 第13-15页 |
| 1.3 跨膜蛋白纯化 | 第15页 |
| 1.4 立题依据 | 第15-16页 |
| 1.5 研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第17页 |
| 2.1.3 酶与主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.4 培养基 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 细菌基因组的提取 | 第19页 |
| 2.2.2 E.coli感受态细胞的制备 | 第19页 |
| 2.2.3 Pmdad基因的克隆和重组菌株的构建 | 第19-20页 |
| 2.2.4 PmDAD的诱导表达和诱导条件的优化 | 第20页 |
| 2.2.5 表达载体的优化 | 第20-21页 |
| 2.2.6 PmDAD的分离纯化及纯化过程的优化 | 第21-22页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE | 第22页 |
| 2.2.8 蛋白浓度的测定 | 第22页 |
| 2.2.9 重组蛋白PmDAD的酶活测定 | 第22-23页 |
| 2.2.10 PmDAD的酶学性质研究 | 第23页 |
| 2.2.11 PmDAD产过氧化氢的研究 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-40页 |
| 3.1 D-氨基酸脱氢酶的分子克隆和诱导表达 | 第24-28页 |
| 3.1.1 Pmdad的预测 | 第24页 |
| 3.1.2 Pmdad的分子克隆 | 第24-25页 |
| 3.1.3 PmDAD的诱导表达 | 第25-26页 |
| 3.1.4 PmDAD1的序列分析 | 第26-28页 |
| 3.2 表达载体的选择和诱导条件的优化 | 第28-31页 |
| 3.2.1 表达载体的选择 | 第28-30页 |
| 3.2.2 诱导条件的优化 | 第30-31页 |
| 3.3 PmDAD1纯化过程的优化及酶学特性的研究 | 第31-40页 |
| 3.3.1 PmDAD1纯化过程的优化 | 第31-34页 |
| 3.3.2 PmDAD1的最适反应pH和pH稳定性 | 第34-35页 |
| 3.3.3 PmDAD1的最适反应温度和温度稳定性 | 第35-36页 |
| 3.3.4 PmDAD1的底物特异性 | 第36页 |
| 3.3.5 金属离子、EDTA·2Na、苯甲酸和对羟基苯甲酸对酶活性的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.6 PmDAD1的动力学参数 | 第37-38页 |
| 3.3.7 PmDAD1产过氧化氢的分析 | 第38-40页 |
| 主要结论与展望 | 第40-41页 |
| 主要结论 | 第40页 |
| 展望 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-48页 |
| 附录1：作者在攻读硕士学位期间的科研成果 | 第48-49页 |
| 附录2：基因序列 | 第49-50页 |
