| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 文献综述 人工设计突变噬菌体展示抗体库的研究进展 | 第10-19页 |
| 1.抗体的多样性的来源 | 第10-11页 |
| 2.自然环境中的特殊抗体 | 第11-14页 |
| 2.1 骆驼重链抗体与纳米抗体 | 第11-13页 |
| 2.2 奶牛源的大分子抗体 | 第13-14页 |
| 3.人工合成文库的发展 | 第14-17页 |
| 3.1 合成文库的概况 | 第14-15页 |
| 3.2 合成文库存在问题和解决方法 | 第15-16页 |
| 3.3 人工合成文库设计流程和筛选 | 第16-17页 |
| 4.抗体的亲和力转移 | 第17-18页 |
| 5.展望 | 第18页 |
| 6.本研究的目的 | 第18-19页 |
| 第二部分 实验研究 | 第19-56页 |
| 第一章 CDR3随机突变文库的设计构建筛选验证 | 第19-46页 |
| 1.实验材料 | 第21页 |
| 2.实验方法 | 第21-27页 |
| 2.1 随机突变文库的设计和构建 | 第21-22页 |
| 2.2 NBL42-ΔCDR3随机突变文库的筛选工作 | 第22-23页 |
| 2.3 多克隆PhageELISA | 第23-24页 |
| 2.4 单克隆PhageELISA | 第24页 |
| 2.5 单克隆的可溶性表达结果 | 第24页 |
| 2.6 NBL42-A1、C10、H1基因片段的连接及质粒转化感受态细胞 | 第24-25页 |
| 2.7 转化子的鉴定 | 第25页 |
| 2.8 蛋白的表达与纯化(以NBL42-A1为例) | 第25-26页 |
| 2.9 ELISA检测纳米抗体NBL42-A1、C10、H1与抗原溶菌酶的结合 | 第26-27页 |
| 2.10 生物信息学对未免疫的骆驼纳米抗体CDR3的分析 | 第27页 |
| 3.实验结果与分析 | 第27-44页 |
| 3.1 NBL42-ΔCDR3突变文库设计 | 第27-28页 |
| 3.2 NBL42-ΔCDR3突变文库基因测序结果 | 第28-29页 |
| 3.3 NBL42-ΔCDR3突变文库构建 | 第29-30页 |
| 3.4 NBL42-ΔCDR3突变文库质量评估 | 第30-31页 |
| 3.5 抗原溶菌酶对NBL42-ΔCDR3突变文库筛选 | 第31-34页 |
| 3.6 抗原CD47对NBL42-ΔCDR3突变文库文库进行筛选 | 第34-35页 |
| 3.7 VHHs的构建、表达、纯化 | 第35-40页 |
| 3.8 利用生物信息学分析纳米抗体CDR3区的位点 | 第40-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第二章 纳米抗体NBL42框架区的研究分析 | 第46-56页 |
| 1.实验材料与方法 | 第47-49页 |
| 1.1 NBL42-H5CDR3和NBL42-CERX重组抗体的设计 | 第47-48页 |
| 1.2 定点突变分析FR3区88位上氨基酸 | 第48页 |
| 1.3 抗原 | 第48页 |
| 1.4 诱导表达纯化NBL42-H5CDR3和NBL42-CERX重组纳米抗体 | 第48页 |
| 1.5 ELISA检测NBL42-H5CDR3和NBL42-CERX抗原结合活性 | 第48-49页 |
| 1.6 ELISA检测NBL42-H5CDR3和NBL42-CERX的亲和力 | 第49页 |
| 2.结果 | 第49-55页 |
| 2.1 NBL42-H5CDR3和NBL42-CERX重组纳米抗体 | 第49-50页 |
| 2.2 NBL42-H5CDR3和NBL42-CERX的抗原结合能力检测 | 第50-51页 |
| 2.3 NBL42-H5CDR3和NBL42-CERX重组抗体亲和力测定 | 第51-52页 |
| 2.4 NBL42和NBL42-C88Y纳米抗体 | 第52-55页 |
| 3.讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 总结和展望 | 第64-65页 |
| 英文缩略语 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 个人简历 | 第67页 |
| 参与课题及发表文章 | 第67-68页 |
