| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 引言 | 第7-16页 |
| 1.1 Ca~(2+)离子通道 | 第7-8页 |
| 1.1.1 Ca~(2+)离子调控的重要生理意义 | 第7页 |
| 1.1.2 Ca~(2+)离子通道类型 | 第7-8页 |
| 1.2 CRAC通道的研究进展 | 第8-13页 |
| 1.2.1 CRAC通道的蛋白的发现 | 第8-10页 |
| 1.2.2 STIM与Orai为CRAC通道的相关蛋白 | 第10页 |
| 1.2.3 CRAC通道对淋巴细胞的作用 | 第10-11页 |
| 1.2.4 CRAC通道蛋白分子机制的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.3 STIM蛋白的结构研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 STIM蛋白与Orai蛋白的计量关系 | 第14页 |
| 1.5 本论文的研究内容和意义 | 第14-16页 |
| 第二章 人源STIM蛋白胞质区删截体及突变体在大肠杆菌中表达和纯化 | 第16-37页 |
| 2.1 表达载体构建 | 第16-21页 |
| 2.1.1 STIM-CT(234-685)野生型截短体质粒构建 | 第18-20页 |
| 2.1.2 STIM-CT-L251S、STIM-CT-4EA截短突变体质粒构建 | 第20-21页 |
| 2.2 STIM截短片段及截短片段突变体蛋白表达 | 第21页 |
| 2.3 STIM截短片段及截短片段突变体蛋白表达提取 | 第21-22页 |
| 2.4 STIM截短片段及截短片段突变体蛋白凝胶分子排阻层析纯化 | 第22页 |
| 2.5 STIM全长与截短片段蛋白分子聚集体均一性生化鉴定 | 第22-23页 |
| 2.6 试验结果及讨论 | 第23-35页 |
| 2.6.1 蛋白纯化结果 | 第23-28页 |
| 2.6.2 蛋白均一性检测 | 第28-34页 |
| 2.6.3 蛋白稳定性检测 | 第34-35页 |
| 2.7 小结 | 第35-37页 |
| 第三章 STIM-CT野生型与突变体电镜结构的初步研究 | 第37-61页 |
| 3.1 实验方法 | 第37-52页 |
| 3.1.1 负染电镜技术 | 第37-42页 |
| 3.1.2 负染制样方法 | 第42-46页 |
| 3.1.3 透射电镜观察概述 | 第46-52页 |
| 3.2 实验结果 | 第52-60页 |
| 3.2.1 常规负染制样条件的摸索 | 第52-54页 |
| 3.2.2 STIM-CT (234-685)截短体的电镜结构 | 第54-60页 |
| 3.3 实验结论 | 第60-61页 |
| 第四章 STIM-CT突变体4EA的蛋白三维结构解析 | 第61-80页 |
| 4.1 实验数据处理 | 第61-69页 |
| 4.2 STIM-CT WT(234-685)三维重构实验结果 | 第69-71页 |
| 4.2.1 数据采集 | 第69-70页 |
| 4.2.2 STIM-CT WT(234-685)二维类平均图 | 第70-71页 |
| 4.3 STIM-CT 4EA(318-322 EEELA→AAALA)实验结果 | 第71-79页 |
| 4.3.1 STIM-CT4EA二维类平均图 | 第71-72页 |
| 4.3.2 STIM-CT4EA初始模型 | 第72-74页 |
| 4.3.4 三维重构refine | 第74-76页 |
| 4.3.5 尝试三次对称性 | 第76-77页 |
| 4.3.6 STIM-CT 4EA三维结构模型的分辨率 | 第77-78页 |
| 4.3.7 RCT法确认三维结构的正确性 | 第78-79页 |
| 4.4 总结与讨论 | 第79-80页 |
| 第五章 结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
