| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-22页 |
| 1 昆虫细胞内钙离子通道研究进展 | 第9-15页 |
| 1.1 细胞内钙离子通道 | 第9页 |
| 1.2 鱼尼丁受体和1,4,5-三磷酸肌醇受体 | 第9-10页 |
| 1.3 RyR和IP_3R的结构 | 第10-12页 |
| 1.4 昆虫RyR和IP_3R | 第12-13页 |
| 1.5 作用于昆虫RyR的新型杀虫剂 | 第13-15页 |
| 2 昆虫RNA干扰研究进展 | 第15-20页 |
| 2.1 RNAi的机制 | 第15-16页 |
| 2.2 昆虫dsRNA的导入方法和摄取机制 | 第16-17页 |
| 2.2.1 昆虫dsRNA的导入方法 | 第16页 |
| 2.2.2 昆虫dsRNA的摄取机制 | 第16-17页 |
| 2.3 影响昆虫RNAi效应的因素 | 第17-18页 |
| 2.4 RNAi技术在昆虫中的应用 | 第18-20页 |
| 2.4.1 基因功能研究 | 第18-19页 |
| 2.4.2 害虫控制研究 | 第19-20页 |
| 2.4.3 抗药性研究 | 第20页 |
| 3 本文研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 赤拟谷盗两种细胞内钙离子通道基因的克隆与序列分析 | 第22-57页 |
| 1 材料与方法 | 第23-27页 |
| 1.1 供试虫源 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第23-24页 |
| 1.2.1 主要试剂 | 第23页 |
| 1.2.2 主要仪器 | 第23-24页 |
| 1.3 试验方法 | 第24-27页 |
| 1.3.1 总RNA的提取及反转录 | 第24页 |
| 1.3.1.1 总RNA提取 | 第24页 |
| 1.3.1.2 cDNA模板的合成 | 第24页 |
| 1.3.2 反转录聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第24-26页 |
| 1.3.3 感受态细胞制备 | 第26页 |
| 1.3.4 连接反应 | 第26页 |
| 1.3.5 连接产物的转化 | 第26-27页 |
| 1.3.6 α互补法进行重组质粒的筛选 | 第27页 |
| 1.3.7 PCR产物克隆 | 第27页 |
| 1.3.8 序列分析 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-55页 |
| 2.1 赤拟谷盗鱼尼丁受体基因(TcRyR)全长cDNA序列克隆 | 第27-41页 |
| 2.2 赤拟谷盗1,4,5-三磷酸肌醇受体基因(TcIP_3R)全长cDNA序列克隆 | 第41-48页 |
| 2.3 TcRyR和TcIP_3R结构域预测 | 第48-50页 |
| 2.4 TcRyR C末端和N末端分析 | 第50-51页 |
| 2.5 TcRyR和TcIP_3R基因组结构分析 | 第51-54页 |
| 2.6 选择性剪接外显子的确认 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 赤拟谷盗两种细胞内钙离子通道基因mRNA的表达分析 | 第57-62页 |
| 1 材料与方法 | 第57-59页 |
| 1.1 供试虫源 | 第57页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第57-58页 |
| 1.3 试验方法 | 第58页 |
| 1.3.1 RNA提取及反转录 | 第58页 |
| 1.3.1.1 总RNA提取 | 第58页 |
| 1.3.1.2 荧光定量PCR所用cDNA模板合成 | 第58页 |
| 1.4 荧光定量PCR | 第58-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-60页 |
| 2.1 鱼尼丁受体基因在赤拟谷盗不同发育阶段的表达分析 | 第59页 |
| 2.2 1,4,5-三磷酸肌醇受体基因在赤拟谷盗不同发育阶段的表达分析 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 赤拟谷盗两种细胞内钙离子通道基因RNAi沉默研究 | 第62-70页 |
| 1 实验材料、仪器与试剂 | 第62-63页 |
| 1.1 试虫 | 第62-63页 |
| 1.2 实验仪器 | 第63页 |
| 1.3 实验药品与试剂 | 第63页 |
| 2 实验方法 | 第63-66页 |
| 2.1 双链RNA(dsRNA)合成 | 第63-65页 |
| 2.1.1 dsDNA合成 | 第63-64页 |
| 2.1.2 PCR产物回收 | 第64页 |
| 2.1.3 转录 | 第64-65页 |
| 2.1.4 纯化dsRNA | 第65页 |
| 2.2 dsRNA注射 | 第65-66页 |
| 2.2.1 500×injection buffer的配置 | 第65页 |
| 2.2.2 dsRNA的注射 | 第65-66页 |
| 2.3 数据处理 | 第66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-68页 |
| 3.1 RNA干扰效率分析 | 第66页 |
| 3.2 RNA干扰表型分析 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文目录 | 第85-86页 |
