| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 乳胶蛋白(Majorlatexproteins,MLP)的发现 | 第13页 |
| 1.2 MLP家族属于Betv1超家族 | 第13-17页 |
| 1.2.1 Betv1超家族的分类 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Betv1蛋白的结构 | 第15-16页 |
| 1.2.3 Betv1蛋白的功能 | 第16-17页 |
| 1.3 MLP的结构 | 第17-19页 |
| 1.4 MLP参与生物胁迫的响应 | 第19-20页 |
| 1.4.1 MLP与生物胁迫 | 第19-20页 |
| 1.4.2 MLP与激素信号 | 第20页 |
| 1.5 MLP参与植物的生长与发育过程 | 第20-21页 |
| 1.5.1 MLP参与果实、花的发育 | 第21页 |
| 1.5.2 MLP参与次级代谢途径 | 第21页 |
| 1.6 MLP参与非生物胁迫 | 第21-23页 |
| 1.6.1 MLP与盐胁迫 | 第22页 |
| 1.6.2 MLP与干旱胁迫 | 第22页 |
| 1.6.3 MLP与机械损伤 | 第22-23页 |
| 1.7 研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 2 材料和方法 | 第24-45页 |
| 2.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 软件和数据库资源 | 第24-25页 |
| 2.1.3 酶、试剂盒与各种生化试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 引物 | 第25-26页 |
| 2.1.4.1 PCR引物 | 第25-26页 |
| 2.1.4.2 实时荧光定量PCR引物 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-45页 |
| 2.2.1 MdMLP423逆境胁迫下的表达 | 第26-28页 |
| 2.2.1.1 苹果苗的培养与处理 | 第26页 |
| 2.2.1.2 苹果叶片和根的总RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.1.3 RNA的纯度、浓度及完整性检测 | 第27页 |
| 2.2.1.4 苹果RNA反转录 | 第27-28页 |
| 2.2.1.5 实时荧光定量PCR | 第28页 |
| 2.2.2 MdMLP423原核表达载体的构建 | 第28-35页 |
| 2.2.2.1 MdMLP423基因的克隆 | 第28-30页 |
| 2.2.2.2 MdMLP423克隆载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 MdMLP423原核表达载体的构建 | 第31-35页 |
| 2.2.3 MdMLP423植物表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.4 MdMLP423启动子的克隆和表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 2.2.4.1 CTAB法提取金冠苹果基因组DNA | 第36-37页 |
| 2.2.4.2 MdMLP423启动子的的克隆 | 第37页 |
| 2.2.4.3 MdMLP423启动子真核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 2.2.5 MdMLP423的组织表达 | 第38-39页 |
| 2.2.5.1 拟南芥的培养 | 第38页 |
| 2.2.5.2 拟南芥花絮侵染 | 第38-39页 |
| 2.2.5.3 GUS组织化学染色 | 第39页 |
| 2.2.6 MdMLP423的亚细胞定位 | 第39-40页 |
| 2.2.6.1 本生烟草的培养 | 第39页 |
| 2.2.6.2 农杆菌介导的瞬时侵染 | 第39-40页 |
| 2.2.7 MdMLP423超表达纯合株系的获得 | 第40-42页 |
| 2.2.7.1 拟南芥花絮侵染 | 第40页 |
| 2.2.7.2 纯合株系的筛选 | 第40-41页 |
| 2.2.7.3 PCR鉴定MdMLP423超表达株系 | 第41-42页 |
| 2.2.8 活性氧含量的测定 | 第42-43页 |
| 2.2.8.1 拟南芥的处理 | 第42页 |
| 2.2.8.2 DAB染色检测H_2O | 第42页 |
| 2.2.8.3 NBT染色检测O_2 | 第42-43页 |
| 2.2.9 MdMLP423超表达株系中相关基因的表达 | 第43-45页 |
| 2.2.9.1 植物材料的处理 | 第43页 |
| 2.2.9.2 Trizol法提取拟南芥RNA | 第43页 |
| 2.2.9.3 拟南芥RNA的反转录 | 第43-44页 |
| 2.2.9.4 实时荧光定量PCR反应体系和程序 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-63页 |
| 3.1 苹果MdMLP423生物信息学分析 | 第45-47页 |
| 3.1.1 MdMLP423基因序列分析 | 第45-46页 |
| 3.1.2 MdMLP423启动子区的顺式作用元件分析 | 第46-47页 |
| 3.2 在原核系统中探究MdMLP423的非生物胁迫抗性 | 第47-50页 |
| 3.2.1 MdMLP423基因的获得及表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.2.2 异源表达MdMLP423增强了大肠杆菌的非生物胁迫抗性 | 第48-50页 |
| 3.3 Gly-richloop及其保守甘氨酸对MdMLP423功能的影响 | 第50-51页 |
| 3.4 MdMLP423的表达特征 | 第51-55页 |
| 3.4.1 MdMLP423的组织表达分析 | 第51-52页 |
| 3.4.2 MdMLP423的亚细胞定位 | 第52-53页 |
| 3.4.3 MdMLP423表达量受ABA和非生物胁迫的诱导 | 第53-55页 |
| 3.5 MdMLP423参与非生物胁迫响应 | 第55-63页 |
| 3.5.1 MdMLP423超表达株系的获得与鉴定 | 第55-56页 |
| 3.5.2 MdMLP423增强了转基因拟南芥的盐胁迫抗性 | 第56-57页 |
| 3.5.3 MdMLP423提高了转基因拟南芥的抗性 | 第57-59页 |
| 3.5.4 MdMLP423增强了转基因植物对外源ABA的耐受性 | 第59-60页 |
| 3.5.5 MdMLP423超表达影响ABA信号途径相关基因的表达 | 第60-61页 |
| 3.5.6 MdMLP423降低了非生物胁迫下ROS的积累 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-67页 |
| 4.1 Gly-rich loop 是 MLP 发挥生物学功能的关键 | 第63-64页 |
| 4.2 MdMLP423 响应非生物胁迫 | 第64-65页 |
| 4.3 Md MLP423 可能通过 ABA 信号途径响应非生物胁迫 | 第65-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第76页 |
