| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第15-27页 |
| 1.1 流感病毒病原结构 | 第16-17页 |
| 1.2 流感病毒的基因组及功能 | 第17-22页 |
| 1.2.1 聚合酶蛋白(PB2、PB1、PA) | 第17-18页 |
| 1.2.2 血凝素(Hemgagglutinin,HA) | 第18-19页 |
| 1.2.3 神经氨酸酶(Neuraminidase,NA) | 第19-20页 |
| 1.2.4 核蛋白(Nucleoprotein,NP) | 第20页 |
| 1.2.5 基质蛋白(Matrixprotein,M) | 第20页 |
| 1.2.6 非结构蛋白(Nonstructuralprotein,NS) | 第20-22页 |
| 1.3 流感病毒感染传播的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.3.1 流感病毒的感染机制 | 第22页 |
| 1.3.2 流感病毒的流行情况 | 第22-23页 |
| 1.4 病毒感染引发天然免疫应答研究进展 | 第23-26页 |
| 1.4.1 模式识别受体 | 第24-25页 |
| 1.4.1.1 Toll样受体(TLRs) | 第24页 |
| 1.4.1.2 RIG-I样受体(RLRs) | 第24-25页 |
| 1.4.2 干扰素(IFN) | 第25页 |
| 1.4.3 白细胞介素(IL) | 第25-26页 |
| 1.4.4 抗病毒蛋白(AVP) | 第26页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 2 材料方法 | 第27-40页 |
| 2.1 材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 病毒株 | 第27页 |
| 2.1.2 实验所用鸡胚及细胞 | 第27页 |
| 2.1.3 主要生物试剂及引物 | 第27-28页 |
| 2.1.4 主要实验溶液的配制 | 第28页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.6 分子生物学分析软件 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-40页 |
| 2.2.1 病毒的增殖 | 第29-30页 |
| 2.2.2 重组病毒的拯救 | 第30-31页 |
| 2.2.2.1 病毒基因的扩增及重组质粒的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.2.2 重组病毒株的拯救以及序列鉴定 | 第31页 |
| 2.2.3 病毒EID_(50)与TCID_(50)测定 | 第31-33页 |
| 2.2.3.1 病毒EID_(50)的检测 | 第32页 |
| 2.2.3.2 MDCK细胞复苏与传代 | 第32页 |
| 2.2.3.3 病毒TCID_(50)的检测 | 第32-33页 |
| 2.2.4 病毒在A549细胞和DF-1细胞上的复制能力检测 | 第33-34页 |
| 2.2.4.1 生长曲线的绘制 | 第33页 |
| 2.2.4.2 间接免疫荧光检测(IFA)病毒在细胞上的复制 | 第33-34页 |
| 2.2.5 模式识别受体及细胞因子表达量的检测 | 第34-40页 |
| 2.2.5.1 细胞接毒 | 第34页 |
| 2.2.5.2 收取接毒的细胞 | 第34-35页 |
| 2.2.5.3 细胞RNA提取及cDNA合成 | 第35-36页 |
| 2.2.5.4 荧光定量PCR引物设计与合成 | 第36-38页 |
| 2.2.5.5 荧光定量PCR引物验证 | 第38页 |
| 2.2.5.6 荧光定量PCR检测模式识别受体及细胞因子表达量 | 第38-40页 |
| 2.2.6 统计分析 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-55页 |
| 3.1 重组质粒构建以及新拯救病毒的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.1.1 基因片段PCR扩增测序及重组质粒测序 | 第40-41页 |
| 3.1.2 拯救病毒的鉴定 | 第41页 |
| 3.2 H9N2亚型亲本株以及重组病毒EID_(50)与TCID_(50)测定 | 第41页 |
| 3.3 病毒感染后细胞病变 | 第41-43页 |
| 3.3.1 病毒感染A549细胞CPE结果 | 第41-42页 |
| 3.3.2 病毒感染DF-1细胞CPE结果 | 第42-43页 |
| 3.4 绘制病毒生长曲线 | 第43-44页 |
| 3.5 间接免疫荧光检测结果 | 第44-46页 |
| 3.5.1 A549细胞间接免疫荧光检测 | 第44-45页 |
| 3.5.2 DF-1细胞间接免疫荧光检测 | 第45-46页 |
| 3.6 模式识别受体及细胞因子mRNA表达量的检测结果 | 第46-55页 |
| 3.6.1 A549细胞模式识别受体及细胞因子mRNA表达量 | 第46-51页 |
| 3.6.1.1 A549细胞荧光定量PCR引物的验证 | 第46-47页 |
| 3.6.1.2 模式识别受体mRNA的表达量检测结果 | 第47-48页 |
| 3.6.1.3 细胞因子mRNA的表达量检测结果 | 第48-51页 |
| 3.6.2 DF-1细胞模式识别受体及细胞因子mRNA表达量 | 第51-55页 |
| 3.6.2.1 DF-1细胞荧光定量PCR引物的验证 | 第51页 |
| 3.6.2.2 模式识别受体mRNA的表达量检测结果 | 第51-52页 |
| 3.6.2.3 细胞因子mRNA的表达量检测结果 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 5 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间论文发表情况 | 第72页 |
