| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第13-33页 |
| 1.1 PRV概况 | 第13页 |
| 1.2 PRV分类学 | 第13页 |
| 1.3 PRV形态结构和理化特征 | 第13-15页 |
| 1.4 PRV基因组及其编码产物 | 第15-17页 |
| 1.4.1 基因组和基因组成 | 第15-16页 |
| 1.4.2 衣壳蛋白 | 第16页 |
| 1.4.3 皮层蛋白 | 第16页 |
| 1.4.4 囊膜蛋白 | 第16-17页 |
| 1.5 PRV复制周期 | 第17-25页 |
| 1.5.1 吸附与侵入 | 第17-18页 |
| 1.5.2 病毒转录激活因子和转录级联 | 第18-20页 |
| 1.5.3 在PRV感染过程中宿主转录本的变化 | 第20-21页 |
| 1.5.4 潜伏期基因表达 | 第21页 |
| 1.5.5 DNA复制 | 第21-22页 |
| 1.5.6 核苷酸代谢 | 第22-24页 |
| 1.5.7 衣壳形成 | 第24页 |
| 1.5.8 DNA衣壳化 | 第24-25页 |
| 1.5.9 病毒释放 | 第25页 |
| 1.6 核定位信号的分类 | 第25-27页 |
| 1.6.1 经典核定位信号 | 第25-26页 |
| 1.6.2 Impβ2 识别的核定位信号 | 第26-27页 |
| 1.6.3 空间表位型核定位信号 | 第27页 |
| 1.7 蛋白质入核转运机制的研究进展 | 第27-32页 |
| 1.7.1 核质转运概述 | 第27-28页 |
| 1.7.2 Impα/β 入核通路 | 第28-31页 |
| 1.7.3 Snurportin-1 介导的入核通路 | 第31页 |
| 1.7.4 仅依赖于Impβ 的入核通路 | 第31页 |
| 1.7.5 仅依赖于Impβ2 的入核通路 | 第31页 |
| 1.7.6 其他入核通路 | 第31-32页 |
| 1.8 研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 第二章 PRV DNA聚合酶UL42与UL30亚基的入核转运机制 | 第33-60页 |
| 2.1 材料和方法 | 第35-43页 |
| 2.1.1 细胞、病毒、载体、抗体和主要试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第36页 |
| 2.1.3 重组质粒构建 | 第36-40页 |
| 2.1.4 UL42单克隆抗体的制备 | 第40页 |
| 2.1.5 UL30多克隆抗体的制备 | 第40页 |
| 2.1.6 EGFP融合蛋白表达和定位分析 | 第40-41页 |
| 2.1.7 免疫荧光试验 | 第41页 |
| 2.1.8 免疫共沉淀和Western blot试验 | 第41-42页 |
| 2.1.9 蛋白表达和纯化 | 第42页 |
| 2.1.10 体外入核转运试验 | 第42-43页 |
| 2.2 结果 | 第43-56页 |
| 2.2.1 UL42与UL30多克隆抗体的制备 | 第43-44页 |
| 2.2.2 UL42 MAb效价测定及亚类鉴定 | 第44-45页 |
| 2.2.3 UL42在不存在其他病毒蛋白时的细胞定位 | 第45页 |
| 2.2.4 UL42包含一个双分型NLS | 第45-48页 |
| 2.2.5 K354、R355和K367是UL42双分型NLS的关键残基 | 第48-49页 |
| 2.2.6 UL42与Impα3 和Impα4 相互作用 | 第49-50页 |
| 2.2.7 UL42与Impα3 和Impα4 的相互作用由UL42双分型NLS介导 | 第50-51页 |
| 2.2.8 UL42核定位是一个受体、温度、能量和NLS依赖的过程 | 第51-52页 |
| 2.2.9 UL42入核转运是由Impα/β 通路介导的 | 第52-53页 |
| 2.2.10 UL30核定位依赖于UL42 | 第53-54页 |
| 2.2.11 UL30 C端41个氨基酸残基是与UL42相互作用的关键区域 | 第54-55页 |
| 2.2.12 UL42双分型NLS是PRV DNA聚合酶入核转运的关键基序 | 第55-56页 |
| 2.3 讨论 | 第56-60页 |
| 2.3.1 疱疹病毒DNA聚合酶辅助亚基包含不同类型的NLS | 第57-58页 |
| 2.3.2 疱疹病毒DNA聚合酶辅助亚基识别不同亚型的Impα | 第58页 |
| 2.3.3 疱疹病毒DNA聚合酶催化亚基入核通路差异明显 | 第58页 |
| 2.3.4 PRV UL42双分型NLS的重要性 | 第58-60页 |
| 第三章 PRV DNA聚合酶UL42亚基是病毒复制的必需基因 | 第60-72页 |
| 3.1 材料和方法 | 第61-64页 |
| 3.1.1 细胞、病毒、载体、抗体和主要试剂 | 第61页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第61-62页 |
| 3.1.3 UL42表达动力学分析 | 第62页 |
| 3.1.4 SiRNA干扰试验 | 第62-63页 |
| 3.1.5 细胞活力测定 | 第63页 |
| 3.1.6 Western blot试验 | 第63页 |
| 3.1.7 免疫荧光试验 | 第63页 |
| 3.1.8 PRV滴度测定 | 第63-64页 |
| 3.1.9 统计分析 | 第64页 |
| 3.2 结果 | 第64-70页 |
| 3.2.1 PRV复制过程中UL42的表达动力学 | 第64-65页 |
| 3.2.2 SiRNAs特异性抑制UL42的体外表达 | 第65页 |
| 3.2.3 SiRNAs细胞毒性作用检测 | 第65-66页 |
| 3.2.4 SiRNAs剂量依赖性抑制PRV感染后UL42的表达 | 第66-67页 |
| 3.2.5 UL42 siRNAs剂量依赖性抑制PRV的复制 | 第67-68页 |
| 3.2.6 下调UL42的表达抑制PRV的一步生长曲线 | 第68-70页 |
| 3.3 讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 全文结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 作者简历 | 第94页 |
