| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩略表 | 第18-21页 |
| 第一章 引言 | 第21-45页 |
| 1.1 禽偏肺病毒的病原学 | 第21-28页 |
| 1.1.1 aMPV的分类和地位 | 第21-23页 |
| 1.1.2 aMPV的形态特征 | 第23页 |
| 1.1.3 aMPV的基因组 | 第23-26页 |
| 1.1.4 aMPV的基因功能研究进展 | 第26-28页 |
| 1.2 禽偏肺病毒的流行病学 | 第28-30页 |
| 1.2.1 aMPV的传播与分布 | 第28-29页 |
| 1.2.2 aMPV的临床症状 | 第29-30页 |
| 1.3 禽偏肺病毒的诊断方法 | 第30-33页 |
| 1.3.1 aMPV的分离方法和培养方法 | 第30-31页 |
| 1.3.2 aMPV的实验室诊断方法 | 第31-33页 |
| 1.4 人偏肺病毒介导膜融合机制 | 第33-38页 |
| 1.4.1 hMPV F蛋白结构特征 | 第33-35页 |
| 1.4.2 hMPV F蛋白介导细胞融合胰酶依赖性 | 第35页 |
| 1.4.3 hMPV F蛋白介导细胞融合低pH依赖性 | 第35-36页 |
| 1.4.4 hMPV F蛋白受体研究 | 第36-38页 |
| 1.5 副黏病毒F蛋白介导膜融合型变过程 | 第38-42页 |
| 1.6 人偏肺病毒抑制先天性免疫机制 | 第42-44页 |
| 1.6.1 hMPV G蛋白抑制先天性免疫机制 | 第42-43页 |
| 1.6.2 hMPV抑制细胞因子信号通路机制 | 第43-44页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第44-45页 |
| 第二章 禽偏肺病毒融合蛋白介导细胞融合胰酶和低pH依赖性 | 第45-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-46页 |
| 2.2.1 合胞体形成法 | 第45页 |
| 2.2.2 报告基因法 | 第45-46页 |
| 2.2.3 生物素-链霉亲和素磁珠分析膜蛋白表达 | 第46页 |
| 2.2.4 统计分析 | 第46页 |
| 2.3 实验结果 | 第46-53页 |
| 2.3.1 胰酶对aMPV F蛋白融合活性的影响 | 第46-47页 |
| 2.3.2 100和101氨基酸位点决定aMPV F蛋白介导细胞融合不需要胰酶 | 第47-49页 |
| 2.3.3 胰酶促进含有 100K101A的aMPV F蛋白融合活性 | 第49页 |
| 2.3.4 低pH促进aMPV/C F蛋白融合活性 | 第49-50页 |
| 2.3.5 残基 294G决定低pH促进aMPV/C F蛋白融合活性 | 第50-51页 |
| 2.3.6 294位点影响aMPV F蛋白融合活性 | 第51-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-54页 |
| 第三章 TMPRSS12参与裂解B型禽偏肺病毒融合蛋白 | 第54-68页 |
| 3.1 实验材料 | 第54页 |
| 3.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 3.2.1 合胞体形成法 | 第54页 |
| 3.2.2 报告基因法 | 第54页 |
| 3.2.3 RNA干扰 (Small interfering RNAs, siRNAs) | 第54页 |
| 3.2.4 生物素-链霉亲和素磁珠分析膜蛋白表达 | 第54页 |
| 3.2.5 病毒滴度测定 | 第54-55页 |
| 3.2.6 RT-PCR分析TMPRSS12 mRNA表达 | 第55页 |
| 3.2.7 qRT-PCR分析TMPRSS12 mRNA表达 | 第55页 |
| 3.2.8 动物实验和病毒分离 | 第55页 |
| 3.2.9 统计分析 | 第55页 |
| 3.3 实验结果 | 第55-66页 |
| 3.3.1 aMPV/B体外生长不需要胰酶 | 第55-56页 |
| 3.3.2 表达TMPRSS12促进aMPV/B F蛋白裂解程度、融合活性和病毒复制 | 第56-58页 |
| 3.3.3 干扰TMPRSS12降低aMPV/B F蛋白裂解程度、融合活性和病毒复制 | 第58-60页 |
| 3.3.4 TMPRSS12裂解aMPV/B F蛋白通过识别裂解位点 | 第60-62页 |
| 3.3.5 TMPRSS12的HDS是裂解aMPV/B F蛋白的催化核心 | 第62-65页 |
| 3.3.6 TMPRSS12在鸡组织分布 | 第65-66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 整合素 αvβ1 促进B型禽偏肺病毒融合蛋白介导细胞融合和病毒感染 | 第68-78页 |
| 4.1 实验材料 | 第68页 |
| 4.2 实验方法 | 第68-69页 |
| 4.2.1 合胞体形成法 | 第68页 |
| 4.2.2 报告基因法 | 第68页 |
| 4.2.3 RGD多肽阻断融合 | 第68页 |
| 4.2.4 抗体阻断融合 | 第68-69页 |
| 4.2.5 病毒复制分析 | 第69页 |
| 4.2.6 RNA干扰 | 第69页 |
| 4.2.7 病毒滴度测定 | 第69页 |
| 4.2.8 生物素-链霉亲和素磁珠分析膜蛋白表达 | 第69页 |
| 4.2.9 细胞-细胞结合实验 | 第69页 |
| 4.2.10 病毒入侵实验 | 第69页 |
| 4.2.11 统计分析 | 第69页 |
| 4.3 实验结果 | 第69-77页 |
| 4.3.1 aMPV/B F蛋白含有保守的RDD基序 | 第69-70页 |
| 4.3.2 多肽阻断抑制aMPV/B F蛋白融合活性和aMPV/B复制 | 第70-71页 |
| 4.3.3 整合素 αv和 β1 抗体阻断抑制aMPV/B F蛋白融合活性和病毒复制 | 第71-72页 |
| 4.3.4 干扰整合素 αv和 β1 表达抑制aMPV/B F蛋白融合活性和病毒复制 | 第72-73页 |
| 4.3.5 表达整合素 αv和 β1 表达促进aMPV/B F蛋白融合活性和病毒复制 | 第73-74页 |
| 4.3.6 非允许细胞系上过表达整合素 αv和 β1 利于aMPV/B感染 | 第74-75页 |
| 4.3.7 突变RDD基序为RAE降低aMPV/B F蛋白的吸附活性和融合活性 | 第75-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-78页 |
| 第五章 B型禽偏肺病毒融合蛋白抑制 β-干扰素产生 | 第78-96页 |
| 5.1 实验材料 | 第78页 |
| 5.2 实验方法 | 第78-80页 |
| 5.2.1 动物感染实验 | 第78-79页 |
| 5.2.2 病毒滴度测定 | 第79页 |
| 5.2.3 IFN-β 表达分析 | 第79页 |
| 5.2.4 荧光素酶报告基因法 | 第79页 |
| 5.2.5 qRT-PCR | 第79-80页 |
| 5.2.6 生物素-链霉亲和素磁珠分析膜蛋白表达 | 第80页 |
| 5.2.7 RNA干扰 | 第80页 |
| 5.2.8 TRIF多肽处理 | 第80页 |
| 5.2.9 细胞-细胞结合实验 | 第80页 |
| 5.2.10 LPS处理 | 第80页 |
| 5.2.11 统计分析 | 第80页 |
| 5.3 实验结果 | 第80-95页 |
| 5.3.1 aMPV/B抑制鸡体内IFN-β 的产生 | 第80-82页 |
| 5.3.2 aMPV/B感染DF-1 细胞抑制IFN-β 的产生 | 第82-85页 |
| 5.3.3 紫外灭活的aMPV/B抑制IFN-β 的表达 | 第85-86页 |
| 5.3.4 aMPV/B F蛋白抑制IFN-β 的表达 | 第86-88页 |
| 5.3.5 aMPV/B F蛋白裂解水平决定IFN-β 的表达量 | 第88-91页 |
| 5.3.6 aMPV/B和aMPV/B F蛋白抑制IFN-β 表达通过TLR3和TLR4途径 | 第91-92页 |
| 5.3.7 CD14参与aMPV/B和aMPV/B F蛋白抑制IFN-β 的表达 | 第92-95页 |
| 5.4 讨论 | 第95-96页 |
| 第六章 全文结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-112页 |
| 附录 | 第112-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 作者简历 | 第118-119页 |
