| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 PBoV的发现 | 第13页 |
| 1.2 PBoV的分类 | 第13-15页 |
| 1.3 PBoV的分子生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.4 PBoV的流行病学调查和疾病相关性 | 第16-18页 |
| 1.4.1 国内PBoV的流行情况 | 第16-17页 |
| 1.4.2 国外PBoV的流行情况 | 第17-18页 |
| 1.5 PBoV的检测技术 | 第18-21页 |
| 1.5.1 环介导等温扩增技术 | 第18页 |
| 1.5.2 间接免疫荧光法 | 第18-19页 |
| 1.5.3 聚合酶链式反应 | 第19页 |
| 1.5.4 实时荧光定量聚合酶链式反应 | 第19-21页 |
| 第二章 PBoV多重PCR检测和基因分型研究的实验方案设计 | 第21-24页 |
| 2.1 本研究的目的、意义 | 第21页 |
| 2.2 实验主要内容 | 第21-23页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第21-22页 |
| 2.2.2 标准品构建及普通多重PCR构建 | 第22页 |
| 2.2.3 三个PBoV基因群组单重实时荧光PCR体系的优化和建立 | 第22页 |
| 2.2.4 多重实时荧光PCR体系同时检测三个PBoV基因群组的优化和建立 | 第22-23页 |
| 2.3 实验流程 | 第23-24页 |
| 第三章 PBoV多重PCR检测方法的建立和应用 | 第24-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 3.1.1 病毒和临床样品 | 第24-25页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第25页 |
| 3.2 引物设计 | 第25-26页 |
| 3.3 病毒核酸提取和质粒标准品制备 | 第26-27页 |
| 3.3.1 PBoV DNA提取 | 第26页 |
| 3.3.2 PCR反应 | 第26页 |
| 3.3.3 PCR产物割胶回收 | 第26页 |
| 3.3.4 PCR目的片段连接 | 第26页 |
| 3.3.5 连接产物转化 | 第26页 |
| 3.3.6 重组质粒提取 | 第26-27页 |
| 3.3.7 重组质粒鉴定 | 第27页 |
| 3.3.8 重组质粒标准品制备 | 第27页 |
| 3.4 PBoV多重PCR体系建立 | 第27-28页 |
| 3.4.1 PBoV多重PCR体系优化 | 第27页 |
| 3.4.2 PBoV多重PCR灵敏度和特异性 | 第27-28页 |
| 3.5 PBoV临床样品多重PCR检测 | 第28页 |
| 3.5.1 样品核酸提取 | 第28页 |
| 3.5.2 临床样品检测 | 第28页 |
| 3.6 结果 | 第28-33页 |
| 3.6.1 PBoV序列系统发育树分析图 | 第28-30页 |
| 3.6.2 标准品构建 | 第30页 |
| 3.6.3 PBoV多重PCR体系优化 | 第30-31页 |
| 3.6.4 PBoV G1, PboV G2和G3 Pbo V多重PCR特异性和灵敏度 | 第31-33页 |
| 3.6.5 临床样品单重和多重普通PCR检测 | 第33页 |
| 3.7 讨论 | 第33-36页 |
| 第四章 EvaGreen多重实时荧光PCR检测PBoV三个基因群组方法的建立和应用 | 第36-56页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 4.1.1 毒源 | 第36-37页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第37页 |
| 4.2 引物设计 | 第37-38页 |
| 4.3 PBoV EvaGreen单重实时荧光PCR | 第38-39页 |
| 4.3.1 PBoV单重荧光PCR特异性及产物Tm值 | 第38页 |
| 4.3.2 PBoV单重荧光PCR灵敏度及重复性 | 第38-39页 |
| 4.4 PBoVEvaGreen多重实时荧光PCR | 第39-40页 |
| 4.4.1 PBoV多重荧光PCR特异性及产物Tm值 | 第39页 |
| 4.4.2 PBoV多重荧光PCR灵敏度及重复性 | 第39-40页 |
| 4.5 PBoVEvaGreen多重实时荧光PCR方法检测临床样品 | 第40页 |
| 4.5.1 临床样品及样品核酸提取 | 第40页 |
| 4.5.2 临床样品检测 | 第40页 |
| 4.6 结果 | 第40-52页 |
| 4.6.1 PBoV单重实时荧光PCR的扩增产物Tm值 | 第40-41页 |
| 4.6.2 PBoV单重实时荧光PCR特异性 | 第41-42页 |
| 4.6.3 PBoV单重实时荧光PCR灵敏度及标准曲线 | 第42-43页 |
| 4.6.4 PBoV单重实时荧光PCR重复性 | 第43-45页 |
| 4.6.5 PBoV多重实时荧光PCR的扩增产物Tm值 | 第45页 |
| 4.6.6 PBoV多重实时荧光PCR特异性 | 第45-46页 |
| 4.6.7 单个PBoV模板多重实时荧光PCR灵敏度及标准曲线 | 第46-48页 |
| 4.6.8 多个PBoV模板多重实时荧光PCR灵敏度 | 第48-49页 |
| 4.6.9 PBoV多重实时荧光PCR重复性 | 第49-50页 |
| 4.6.10 PBoV临床样品实时荧光PCR检测 | 第50-52页 |
| 4.7 讨论 | 第52-56页 |
| 第五章 PBoV遗传多样性分析 | 第56-63页 |
| 5.1 材料和方法 | 第56页 |
| 5.2 结果 | 第56-61页 |
| 5.3 讨论 | 第61-63页 |
| 结论与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 研究生学习期间主要成果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
