| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 附录 | 第7-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-17页 |
| 1.1 肝癌简介 | 第10页 |
| 1.2 肝细胞核因子(HNF)家族 | 第10页 |
| 1.3 HNF-1α结构及功能特点 | 第10-11页 |
| 1.4 HNF1α与肿瘤 | 第11-12页 |
| 1.5 HNF1a的表达调控 | 第12页 |
| 1.6 PAX6 | 第12-14页 |
| 1.7 TGF-β | 第14-16页 |
| 1.8 micro RNA | 第16页 |
| 1.9 研究目的和内容 | 第16-17页 |
| 第2章 材料与方法 | 第17-31页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第17-21页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.2 菌株和细胞 | 第18页 |
| 2.1.3 载体 | 第18页 |
| 2.1.4 酶及生化试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.5 引物序列 | 第19-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 HNF1α启动子片段的克隆及报告基因质粒构建 | 第21-24页 |
| 2.2.2 HNF1α启动子pax6结合位点突变的报告基因质粒构建 | 第24-25页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第25-26页 |
| 2.2.4 总RNA的抽提 | 第26页 |
| 2.2.5 RNA逆转录 | 第26-27页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 2.2.7 荧光素酶报告基因实验 | 第28页 |
| 2.2.8 western blot | 第28-29页 |
| 2.2.9 染色质免疫共沉淀(CHIP) | 第29-31页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第31-66页 |
| 3.1 细胞株中HNF1α内源表达情况检测 | 第31页 |
| 3.2 HNF1α启动子报告基因质粒构建 | 第31-35页 |
| 3.3 不同长度HNF1α启动子作用效果实验 | 第35页 |
| 3.4 软件预测作用于HNF1α启动子的潜在转录调控因子 | 第35-36页 |
| 3.5 多种肝癌细胞株中RREB1和HNF1α的内源表达情况 | 第36-37页 |
| 3.6 RREB1对HNF1α基因表达调控作用的研究 | 第37-39页 |
| 3.6.1 siRREB1对HNF1α启动子报告基因的影响 | 第37-38页 |
| 3.6.2 siRREB1对内源HNF1α基因表达的影响 | 第38-39页 |
| 3.7 多种肝癌细胞株中PAX6和HNF1α的内源表达情况 | 第39-40页 |
| 3.8 抑制PAX6表达对HNF1α基因表达的影响 | 第40-43页 |
| 3.8.1 siPAX6对HNF1α启动子报告基因的影响 | 第40-41页 |
| 3.8.2 siPAX6对内源HNF1α基因表达的影响 | 第41-43页 |
| 3.9 PAX6过表达质粒的构建 | 第43-45页 |
| 3.10 过表达PAX6对HNF1α基因表达的影响 | 第45-47页 |
| 3.10.1 过表达PAX6对HNF1α启动子报告基因的影响 | 第45页 |
| 3.10.2 过表达PAX6对内源HNF1α基因表达的影响 | 第45-47页 |
| 3.11 PAX6对HNF1α下游基因表达的影响 | 第47页 |
| 3.12 HNF1α启动子PAX6作用位点突变报告基因质粒构建 | 第47-49页 |
| 3.13 PAX6作用位点突变的报告基因质粒实验 | 第49-50页 |
| 3.13.1 siPAX6对pGL3-1α promoter-PAX6M质粒报告基因表达的影响 | 第49页 |
| 3.13.2 过表达PAX6对pGL3-1α promoter-PAX6M质粒报告基因表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.14 PAX6与HNF1α启动子的相互作用 | 第50-51页 |
| 3.15 含HNF1α 3’UTR报告基因质粒构建 | 第51-54页 |
| 3.16 HNF1α 3’UTR作用效果实验 | 第54-55页 |
| 3.17 能够作用于HNF1α 3’UTR的microRNA的预测及检验 | 第55-58页 |
| 3.17.1 软件预测能作用于HNF1α 3’UTR的潜在microRNA | 第55-56页 |
| 3.17.2 microRNA对含有HNF1α 3’UTR的报告基因表达的影响 | 第56-57页 |
| 3.17.3 microRNA对内源HNF1α基因mRNA稳定性的影响 | 第57-58页 |
| 3.17.4 mir-564和mir-665对细胞内HNF1α蛋白表达的影响 | 第58页 |
| 3.18 mir-564和mir-665对HNF1α下游基因表达的影响 | 第58-59页 |
| 3.19 TGF-β对HNF1α基因表达的影响 | 第59-60页 |
| 3.20 TGF-β对HNF1α基因转录水平的影响 | 第60-62页 |
| 3.21 TGF-β对HNF1α基因mRNA水平的影响 | 第62-63页 |
| 3.22 讨论 | 第63-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 硕士期间发表论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
