| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 概述 | 第13-30页 |
| 1.1 纤维素分解酶系的组成 | 第13-14页 |
| 1.2 纤维素酶的分子结构 | 第14页 |
| 1.3 纤维素酶(系)的主要性质 | 第14-15页 |
| 1.4 产生纤维素酶的微生物 | 第15-16页 |
| 1.5 纤维素酶的应用 | 第16-19页 |
| 1.5.1 在畜牧业中的应用 | 第16-17页 |
| 1.5.2 在食品工业及发酵酿造中的应用 | 第17-18页 |
| 1.5.3 在其它方面的应用 | 第18-19页 |
| 1.6 纤维素酶的研究概况 | 第19-21页 |
| 1.6.1 国外研究现状 | 第19页 |
| 1.6.2 国内研究现状 | 第19-20页 |
| 1.6.3 纤维素酶研究与实际应用中存在的问题 | 第20-21页 |
| 1.7 高产纤维素酶生产菌的改造 | 第21-25页 |
| 1.7.1 诱变育种 | 第22-23页 |
| 1.7.2 基因重组技术 | 第23-24页 |
| 1.7.3 基因定位突变技术 | 第24页 |
| 1.7.4 原生质体融合技术 | 第24-25页 |
| 1.8 菌种选育的新方法——基因组重排技术 | 第25-28页 |
| 本文的立题依据及意义 | 第28-30页 |
| 第二章 青霉M114及Ju-A10的原生质体制备与再生 | 第30-45页 |
| 引言 | 第30页 |
| 2.1 材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 菌株 | 第30页 |
| 2.1.2 培养基 | 第30-31页 |
| 2.1.3 脱壁酶类 | 第31页 |
| 2.1.4 渗透压稳定剂 | 第31页 |
| 2.1.5 预处理剂 | 第31页 |
| 2.1.6 孢子核染色剂 | 第31-32页 |
| 2.2 方法 | 第32-33页 |
| 2.2.1 菌丝培养 | 第32页 |
| 2.2.2 菌丝干重测定 | 第32页 |
| 2.2.3 原生质体的制备与纯化 | 第32页 |
| 2.2.4 原生质体的再生及再生率的计算 | 第32-33页 |
| 2.2.5 孢子核染色 | 第33页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第33-44页 |
| 2.3.1 菌丝体制备原生质体 | 第33-39页 |
| 2.3.1.1 青霉M114生长曲线的测定 | 第33-34页 |
| 2.3.1.2 原生质体形成过程的观察 | 第34-36页 |
| 2.3.1.3 原生质体的形态 | 第36-37页 |
| 2.3.1.4 酶浓度、酶解时间及菌丝体年龄对原生质体形成的影响 | 第37-39页 |
| 2.3.2 孢子制备原生质体 | 第39-42页 |
| 2.3.2.1 孢子核染色 | 第39-40页 |
| 2.3.2.2 孢子与原生质体形态比较 | 第40页 |
| 2.3.2.3 Triton X-100预处理对孢子原生质体产量的影响 | 第40-41页 |
| 2.3.2.4 萌发时间及酶解时间对孢子原生质体产量的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.3 原生质体的再生 | 第42-44页 |
| 本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 基于原生质体融合的基因组重排及融合子的形态学观察 | 第45-56页 |
| 引言 | 第45-46页 |
| 3.1 材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 菌株 | 第46页 |
| 3.1.2 融合剂 | 第46-47页 |
| 3.1.3 筛选培养基 | 第47页 |
| 3.2 方法 | 第47-48页 |
| 3.2.1 原生质体融合 | 第47页 |
| 3.2.2 菌丝、分生孢子梗和孢子等形态观察 | 第47-48页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第48-55页 |
| 3.3.1 青霉M114及Ju-A10的原生质体融合 | 第48-50页 |
| 3.3.1.1 原生质体融合观察 | 第48-49页 |
| 3.3.1.2 融合子有效检出 | 第49-50页 |
| 3.3.1.3 融合子的形态学特征 | 第50页 |
| 3.3.2 基于多亲本原生质体融合的基因组重排 | 第50-55页 |
| 3.3.2.1 对重组子进行形态学观察 | 第51-55页 |
| 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 重组子与亲本产酶性质的比较 | 第56-70页 |
| 引言 | 第56页 |
| 4.1 材料 | 第56-59页 |
| 4.1.1 菌株 | 第56-57页 |
| 4.1.2 培养基 | 第57页 |
| 4.1.3 DNS试剂 | 第57页 |
| 4.1.4 1％的CMC溶液 | 第57-58页 |
| 4.1.5 蛋白浓度检测试剂 | 第58页 |
| 4.1.6 胞外全蛋白的SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳) | 第58-59页 |
| 4.2 方法 | 第59-60页 |
| 4.2.1 DNS法测定CMC酶活 | 第59-60页 |
| 4.2.1.1 培养条件 | 第59页 |
| 4.2.1.2 葡萄糖标准曲线的测定 | 第59页 |
| 4.2.1.3 CMCase测定 | 第59-60页 |
| 4.2.2 胞外全蛋白的SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳) | 第60页 |
| 4.2.2.1 蛋白浓度检测——Bradford检测法 | 第60页 |
| 4.2.2.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDS-PAGE) | 第60页 |
| 4.2.2.3 内切酶活性电泳 | 第60页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第60-69页 |
| 4.3.1 融合子Fu-3的性状鉴定及分析 | 第60-64页 |
| 4.3.1.1 融合子Fu-3酶活的测定 | 第61-62页 |
| 4.3.1.2 Fu-3的胞外全蛋白SDS-PAGE电泳 | 第62-64页 |
| 4.3.2 基因组重捧所得重组子的鉴定 | 第64-69页 |
| 4.3.2.1 重组子与亲本酶活比较 | 第64-65页 |
| 4.3.2.2 融合菌株的产酶稳定性研究 | 第65-66页 |
| 4.3.2.3 融合子及其亲本的胞外全蛋白SDS-PAGE及复性电泳分析 | 第66-69页 |
| 本章小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第76页 |
