| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 缩略语(按照英文首字母顺序排序) | 第14-15页 |
| 第一章 MicroRNA 及基因芯片相关研究进展 | 第15-27页 |
| 1 miRNA 的相关研究 | 第16-21页 |
| ·miRNA 的发现及其自身特点 | 第16页 |
| ·miRNA 的生源论及基因表达调控的机制 | 第16-17页 |
| ·miRNAs 与疾病之间的关系 | 第17-18页 |
| ·组织特异性表达miRNA | 第18-19页 |
| ·与miRNA 生物信息学研究相关的数据库 | 第19-21页 |
| 2 微流体芯片（μParaflo? Microfluidic PicoArray Reactor） | 第21-25页 |
| ·基因芯片的历史沿革及相关研究 | 第21-22页 |
| ·微流体芯片 | 第22页 |
| ·微流体芯片与点样芯片（Spotted Oligonucleotide Microarrays）之间的比较 | 第22-25页 |
| ·点样芯片 | 第22页 |
| ·原位合成（In situ synthesis）微流体芯片 | 第22-24页 |
| ·点样芯片与微流体芯片杂交信号 | 第24-25页 |
| ·微流体芯片的应用 | 第25页 |
| 3 展望 | 第25-27页 |
| 第二章 研究目的和实验方案 | 第27-29页 |
| 1 研究目的和意义 | 第27页 |
| 2 研究的主要内容 | 第27-28页 |
| 3 实验的技术路线 | 第28-29页 |
| 第三章 基于文献搜索小鼠不同组织表达miRNAs 库的构建 | 第29-37页 |
| 1 材料 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29页 |
| 3 结果 | 第29-36页 |
| ·小鼠各个组织miRNA 表达信息 | 第29-33页 |
| ·不同组织表达的miRNAs 及组织特异性表达的miRNAs 统计分析 | 第33-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 小鼠不同组织small RNA 库构建 | 第37-53页 |
| 1 材料与设备及试剂 | 第37-40页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·设备与试剂 | 第37页 |
| ·设备 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·试剂配制 | 第37-40页 |
| ·40 %（w/v, 100 ml）丙烯酰胺（Acrylamide） | 第37-38页 |
| ·10 %（w/v，1 ml）过硫酸铵（APS） | 第38页 |
| ·1mm 玻璃板15 % urea-PAGE 凝胶配置（RNA 电泳用，7.5 ml） | 第38页 |
| ·0.75 mm 玻璃板696非变性PAGE 凝胶配置（DNA 电泳用，5 ml） | 第38页 |
| ·5×TBE buffer (pH 8.3) (500 ml) | 第38页 |
| ·3 M 醋酸钠（pH 5.2）（100 ml） | 第38-39页 |
| ·10×MOPS buffer (pH 7.0) (200 ml) | 第39页 |
| ·MOPS 胶配置方法 | 第39页 |
| ·10×RNA Loading buffer（Agarose 凝胶电泳用，1 ml） | 第39页 |
| ·2×RNA Loading buffer（PAGE 凝胶电泳用，1 ml） | 第39-40页 |
| 2 方法 | 第40-45页 |
| ·小鼠组织总RNA 分离及浓缩 | 第40页 |
| ·总RNA 分离 | 第40页 |
| ·总RNA 浓缩 | 第40页 |
| ·15 %尿素变性PAGE 凝胶分离small RNA | 第40-45页 |
| ·15 %尿素变性PAGE 凝胶预电泳 | 第40页 |
| ·样品电泳 | 第40-41页 |
| ·割胶回收分离small RNA | 第41页 |
| ·连接5’RNA ADT | 第41-42页 |
| ·15 %尿素变性PAGE 胶回收5’RNA ADT 与small RNA 连接后的产物 | 第42页 |
| ·连接3’RNA ADT | 第42-43页 |
| ·15%尿素变性PAGE 胶回收3’RNA ADT 与small RNA 连接后的产物 | 第43页 |
| ·连接5’RNA ADT 和3’RNA ADT 的small RNA 的逆转录（RT）和PCR 扩增 | 第43-44页 |
| ·连接产物RT 生成cDNA | 第43页 |
| ·PCR 扩增small RNA | 第43-44页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第44页 |
| ·6 %非变性PAGE 凝胶回收构建的miRNA 的DNA 库 | 第44-45页 |
| ·准备凝胶电泳 | 第44页 |
| ·割胶回收miRNA 对应的DNA 片段 | 第44-45页 |
| ·miRNA 文库验证 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-52页 |
| ·8 周龄雄性小鼠六种组织总RNA 提取及检测 | 第45-46页 |
| ·small RNA PAGE 回收 | 第46-47页 |
| ·5’RNA ADT 连接结果 | 第47-48页 |
| ·3’RNA ADT 连接结果 | 第48页 |
| ·RT-PCR 结果 | 第48-49页 |
| ·割胶回收miRNA DNA 库 | 第49-50页 |
| ·Second PCR | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 微流体PicoArray 芯片筛选组织特异性表达miRNA | 第53-66页 |
| 1 材料 | 第53页 |
| 2 设备与试剂 | 第53页 |
| ·主要设备及软件 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·6×SSPE 缓冲液配置 | 第53页 |
| ·其他试剂 | 第53页 |
| 3 方法 | 第53-56页 |
| ·寡核苷酸微流体PicoArray 芯片合成 | 第53页 |
| ·miRNA 库标记及杂交 | 第53-55页 |
| ·miRNA 库PCR 荧光标记 | 第54-55页 |
| ·寡核苷酸探针与荧光标记产物杂交 | 第55页 |
| ·杂交图像采集及数据分析 | 第55-56页 |
| 4 结果 | 第56-65页 |
| ·芯片杂交结果图像 | 第56页 |
| ·芯片数据分析 | 第56-65页 |
| ·芯片检测到的小鼠六种组织中表达的miRNAs | 第56-61页 |
| ·芯片实验结果与精读文献收集的miRNAs 比较 | 第61页 |
| ·六种组织中高丰度表达的miRNAs | 第61-62页 |
| ·组织特异性表达的miRNAs | 第62-65页 |
| 5 讨论 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
