| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第9-15页 |
| 1.1 矮沙冬青 | 第9-10页 |
| 1.1.1 矮沙冬青的分布与种类 | 第9页 |
| 1.1.2 矮沙冬青的生长环境 | 第9页 |
| 1.1.3 矮沙冬青的生物学特性 | 第9-10页 |
| 1.1.4 矮沙冬青的利用价值 | 第10页 |
| 1.2 抗冻蛋白AFP及抗冻蛋白基因 | 第10-14页 |
| 1.2.1 抗冻蛋白 | 第10-11页 |
| 1.2.2 植物抗冻蛋白 | 第11-12页 |
| 1.2.3 植物抗冻蛋白基因 | 第12-13页 |
| 1.2.4 矮沙冬青抗冻蛋白 | 第13页 |
| 1.2.5 矮沙冬青抗冻蛋白基因 | 第13-14页 |
| 1.3 本研究目的意义 | 第14-15页 |
| 2 实验材料与方法 | 第15-26页 |
| 2.1 技术路线 | 第15页 |
| 2.2 实验方法 | 第15-26页 |
| 2.2.1 构建pTU-AnAFP植物表达载体 | 第15-19页 |
| 2.2.2 玉米胚性愈伤组织培养 | 第19页 |
| 2.2.3 植物表达载体转化农杆菌 | 第19-20页 |
| 2.2.4 农杆菌的浸染转化 | 第20-21页 |
| 2.2.5 玉米抗性幼胚和胚性愈伤组织的筛选和植株再生 | 第21-22页 |
| 2.2.6 再生植株的PCR检测 | 第22-23页 |
| 2.2.7 低温胁迫处理后转基因玉米和野生型玉米的表型观察 | 第23页 |
| 2.2.8 T_1代稳定阳性植株的Southern杂交检测 | 第23-24页 |
| 2.2.9 荧光定量PCR检测阳性植株AnAFP表达量 | 第24-26页 |
| 3 结果分析 | 第26-38页 |
| 3.1 构建植物表达载体pTU-AnAFP | 第26-29页 |
| 3.1.1 矮沙冬青抗冻蛋白基因ORF的PCR扩增产物 | 第26-27页 |
| 3.1.2 重组菌落的PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 3.1.3 阳性克隆的测序结果 | 第28-29页 |
| 3.1.4 转化表达载体的农杆菌菌株 | 第29页 |
| 3.2 玉米愈伤组织的获得 | 第29-30页 |
| 3.3 农杆菌介导转化玉米及抗性玉米再生 | 第30-32页 |
| 3.3.1 农杆菌介导的玉米转化 | 第30页 |
| 3.3.2 抗性愈伤组织的获得 | 第30-31页 |
| 3.3.3 转基p因植株的再生 | 第31-32页 |
| 3.4 转基因再生植株的分子检测 | 第32-38页 |
| 3.4.1 T_0代的转基因植株PCR检测 | 第32-33页 |
| 3.4.2 T_1代的转基因植株PCR检测 | 第33-34页 |
| 3.4.3 低温胁迫处理后转基因玉米和野生型玉米的表型观察 | 第34-35页 |
| 3.4.4 T_1代的转基因植株Southern blot检测 | 第35-36页 |
| 3.4.5 荧光定量PCR检测阳性植株AnAFP表达量 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 4.1 转基因阳性植株的分子检测 | 第38页 |
| 4.2 AnAFP基因在玉米中异源表达受低温胁迫的影响 | 第38-39页 |
| 4.3 抗冻蛋白AnAFP的耐寒性机制 | 第39页 |
| 4.4 抗冻基因的研究现状 | 第39-40页 |
| 5 展望 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第46页 |
