| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 E.coli F18与仔猪腹泻病 | 第11-12页 |
| 1.1 产肠毒素性大肠杆菌的危害 | 第11页 |
| 1.2 E.coli F18的致病机理 | 第11页 |
| 1.3 E.coli F18抗病育种现状 | 第11-12页 |
| 2 LBP基因的研究进展 | 第12-17页 |
| 2.1 LBP的结构和来源 | 第12-13页 |
| 2.2 LBP的表达调控 | 第13页 |
| 2.3 LBP的主要作用机制 | 第13-14页 |
| 2.4 LBP的致炎功能 | 第14页 |
| 2.5 LBP的保护功能 | 第14-15页 |
| 2.6 LBP病理标记作用 | 第15-16页 |
| 2.7 LBP与其他分子的相互作用 | 第16-17页 |
| 3 甲基化研究 | 第17-19页 |
| 3.1 表观遗传学与DNA甲基化 | 第17页 |
| 3.2 DNA甲基化与疾病研究 | 第17-18页 |
| 3.3 DNA甲基化的检测方法 | 第18-19页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 梅山猪LBP基因组织表达谱、时空表达规律及与E.coli F18感染相关性的初步探究 | 第20-29页 |
| 1 材料与方法 | 第21-24页 |
| 1.1 试验材料 | 第21页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第21页 |
| 1.1.2 主要试验仪器 | 第21页 |
| 1.1.3 主要试验试剂 | 第21页 |
| 1.2 试验方法 | 第21-24页 |
| 1.2.1 细胞培养及LPS处理 | 第21-22页 |
| 1.2.2 RNA的提取 | 第22页 |
| 1.2.3 RNA的检测 | 第22-23页 |
| 1.2.4 荧光定量引物设计 | 第23页 |
| 1.2.5 mRNA反转录 | 第23-24页 |
| 1.2.6 PCR扩增 | 第24页 |
| 1.2.7 Real-time PCR检测 | 第24页 |
| 1.2.8 统计分析 | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-27页 |
| 2.1 组织RNA提取结果、LBP基因的扩增曲线和熔解曲线 | 第24-25页 |
| 2.2 梅山猪LBP基因组织表达谱分析 | 第25-26页 |
| 2.3 LBP基因在不同发育时期梅山猪肝脏组织中的表达规律分析 | 第26页 |
| 2.4 LPS诱导IPEC-J2猪肠上皮细胞前后LBP的表达情况 | 第26-27页 |
| 3 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 梅山猪LB基因核心启动子区的确定及其重要转录因子结合位点预测分析 | 第29-38页 |
| 1 材料与方法 | 第29-33页 |
| 1.1 试验材料 | 第29-30页 |
| 1.1.1 试验细胞和载体 | 第29-30页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第30页 |
| 1.1.3 试验仪器 | 第30页 |
| 1.2 试验方法 | 第30-33页 |
| 1.2.1 LBP基因启动子区生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 1.2.2 双酶切 | 第31页 |
| 1.2.3 连接 | 第31页 |
| 1.2.4 转化 | 第31-32页 |
| 1.2.5 质粒抽提 | 第32页 |
| 1.2.6 质粒转染 | 第32-33页 |
| 1.2.7 双荧光素酶检测 | 第33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-36页 |
| 2.1 猪LBP基因启动子区的CpG岛预测 | 第33-34页 |
| 2.2 猪LBP基因核心启动子区的预测及缺失片段的设定 | 第34页 |
| 2.3 酶切结果及测序鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4 双荧光素酶检测结果 | 第35页 |
| 2.5 核心启动子区转录因子结合域 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 梅山猪LBP基因核心启动子区甲基化水平检测及其与mRNA表达相关性分析 | 第38-46页 |
| 1 材料与方法 | 第38-41页 |
| 1.1 试验材料 | 第38-39页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第38页 |
| 1.1.2 主要试验仪器 | 第38-39页 |
| 1.1.3 主要试验试剂 | 第39页 |
| 1.2 试验方法 | 第39-41页 |
| 1.2.1 DNA提取 | 第39页 |
| 1.2.2 亚硫酸盐修饰 | 第39-40页 |
| 1.2.3 引物设计及PCR扩增 | 第40页 |
| 1.2.4 琼脂糖凝胶检测 | 第40页 |
| 1.2.5 焦磷酸甲基化检测 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-44页 |
| 2.1 琼脂糖凝胶检测 | 第41-42页 |
| 2.2 梅山仔猪不同组织LBP基因目的片段甲基化检测结果 | 第42-43页 |
| 2.3 梅山猪不同发育阶段肝脏组织LBP基因目的片段甲基化检测结果 | 第43页 |
| 2.4 猪LBP基因甲基化水平与mRNA表达相关性分析 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 全文结论与创新点 | 第46-47页 |
| 不足之处及下一步工作计划 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第59-61页 |
