| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-25页 |
| 第一章 NS5B 和整合素Β3 在猪瘟病毒复制增殖中的作用研究进展 | 第13-25页 |
| 1.1 猪瘟病毒概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 CSFV 基因结构与功能 | 第14-16页 |
| 1.2 NS5B | 第16-18页 |
| 1.2.1 NS5B 的作用机制 | 第16-17页 |
| 1.2.2 NS5B 作用研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 整合素 | 第18-25页 |
| 1.3.1 整合素的结构和功能 | 第18-21页 |
| 1.3.2 整合素研究进展 | 第21-25页 |
| 试验研究 | 第25-105页 |
| 第二章 猪瘟病毒 NS5B 蛋白的 RNA 聚合酶功能研究 | 第25-41页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-29页 |
| 2.1.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.2 方法 | 第26-29页 |
| 2.2 结果 | 第29-39页 |
| 2.2.1 pUNO-NS5B 及 pUNO-NS5B~(GAA)载体构建与鉴定 | 第29页 |
| 2.2.2 细胞转染及 NS5B RNA 聚合酶活性的细胞水平检测 | 第29-30页 |
| 2.2.3 猪瘟病毒 NS5B 氨基酸序列亲疏水性预测分析 | 第30页 |
| 2.2.4 pet21b-NS5B^24 表达载体构建与鉴定 | 第30页 |
| 2.2.5 猪瘟病毒 NS5B^24 蛋白的表达与纯化 | 第30页 |
| 2.2.6 猪瘟病毒 NS5B~(mut). 蛋白的表达与纯化 | 第30页 |
| 2.2.7 蛋白水平检测猪瘟病毒 NS5B 的聚合酶活性 | 第30-31页 |
| 2.2.8 猪瘟病毒 NS5B~(mut).蛋白体外 RNA 聚合酶活性检测 | 第31页 |
| 2.2.9 抑制猪瘟病毒 NS5B 聚合酶活性的药物筛选 | 第31-39页 |
| 2.3 讨论 | 第39-40页 |
| 2.4 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 猪瘟病毒衣壳蛋白（CORE）对 NS5B 聚合酶功能影响的研究 | 第41-68页 |
| 3.1 材料与方法 | 第42-46页 |
| 3.1.1 材料和试剂 | 第42页 |
| 3.1.2 方法 | 第42-46页 |
| 3.2 结果 | 第46-65页 |
| 3.2.1 重叠延伸 PCR 方法构建 pUNO-Core Eystrup 株及石门株载体 | 第46页 |
| 3.2.2 5BR 试验证明猪瘟病毒 Core 可增强 NS5B 的 RNA 聚合酶活性 | 第46页 |
| 3.2.3 Co-IP 证明猪瘟病毒 NS5B 可与 Core 免疫共沉淀 | 第46-47页 |
| 3.2.4 免疫荧光试验证明猪瘟病毒 NS5B 与 Core 共定位于细胞质 | 第47页 |
| 3.2.5 猪瘟病毒 Core 蛋白二级和三级结构预测结果图 | 第47页 |
| 3.2.6 pUNO-Core、Pet21b-Core 及其截短型基因载体构建及三级结构分析 | 第47页 |
| 3.2.7 猪瘟病毒 Core 蛋白表达纯化结果 | 第47页 |
| 3.2.8 猪瘟病毒 Core 蛋白可促进 NS5B 的 RNA 聚合酶活性 | 第47-48页 |
| 3.2.9 猪瘟病毒 Core 增强 NS5B 的 RNA 聚合酶活性的特性具有种属特异性 | 第48页 |
| 3.2.10 猪瘟病毒 Core 可以与 HCV 病毒蛋白共定位 | 第48页 |
| 3.2.11 DSF 证实猪瘟病毒 NS5B 与 Core 蛋白存在空间构象上的相互作用 | 第48页 |
| 3.2.12 Core 不依赖其前端 21 个氨基酸来增强 NS5B 的 RNA 聚合酶活性 | 第48-49页 |
| 3.2.13 电镜观察猪瘟病毒 Core 蛋白体外包装成猪瘟病毒样粒子 | 第49-65页 |
| 3.3 讨论 | 第65-67页 |
| 3.4 小结 | 第67-68页 |
| 第四章 猪瘟病毒 NS5B 晶体学研究 | 第68-85页 |
| 4.1 材料与方法 | 第69-72页 |
| 4.1.1 材料和试剂 | 第69页 |
| 4.1.2 方法 | 第69-72页 |
| 4.2 结果 | 第72-83页 |
| 4.2.1 NS5B 表达载体的构建 | 第72页 |
| 4.2.2 猪瘟病毒 pet21b-NS5B 无标签蛋白的纯化 | 第72页 |
| 4.2.3 猪瘟病毒 pet21b-NS5B^24 无标签蛋白纯化 | 第72-73页 |
| 4.2.4 psumo-NS5B^24 蛋白纯化 | 第73页 |
| 4.2.5 pet21b-NS5B-71-679 无标签蛋白的纯化 | 第73页 |
| 4.2.6 不同病毒中 NS5B 氨基酸序列比对图 | 第73页 |
| 4.2.7 猪瘟病毒 NS5B 二级和三级结构预测图 | 第73页 |
| 4.2.8 猪瘟病毒 NS5B 蛋白稳定区的确定 | 第73页 |
| 4.2.9 猪瘟病毒 NS5B 蛋白 DLS 分析 | 第73页 |
| 4.2.10 猪瘟病毒 NS5B 结晶条件筛选 | 第73-83页 |
| 4.3 讨论 | 第83-84页 |
| 4.4 小结 | 第84-85页 |
| 第五章 整合素在猪瘟病毒复制增殖中的作用研究 | 第85-105页 |
| 5.1 材料与方法 | 第86-92页 |
| 5.1.1 材料和试剂 | 第86页 |
| 5.1.2 方法 | 第86-92页 |
| 5.2 结果 | 第92-103页 |
| 5.2.1 一步法实时荧光定量 PCR 方法的建立 | 第92页 |
| 5.2.2 一步法及两步法实时荧光定量 PCR 检测猪瘟病毒增殖情况 | 第92页 |
| 5.2.3 免疫荧光和免疫细胞化学测定四种细胞中猪瘟病毒增殖情况 | 第92页 |
| 5.2.4 免疫荧光和免疫细胞化学测定 4 种细胞中猪瘟病毒增殖情况 | 第92-93页 |
| 5.2.5 细胞消化试验测定细胞的黏附能力 | 第93页 |
| 5.2.6 细胞黏附和细胞增殖试验 | 第93页 |
| 5.2.7 抗体阻断整合素β3 降低了猪瘟病毒的增殖量 | 第93-94页 |
| 5.2.8 整合素干扰载体瞬时转染及干扰效果鉴定 | 第94页 |
| 5.2.9 稳定表达干扰载体的细胞筛选及病毒增殖情况测定 | 第94页 |
| 5.2.10 细胞转染 let7 模拟物或者 let7 抑制物之后猪瘟病毒增殖情况测定 | 第94页 |
| 5.2.11 细胞转染 let7 模拟物或者 let7 抑制物之后整合素β3 含量的测定 | 第94页 |
| 5.2.12 猪瘟病毒感染细胞后测定细胞内 let7a、let7c、let7f 和 let7i 的表达量 | 第94-95页 |
| 5.2.13 干扰掉整合素β3 后测定细胞内 let7a、let7c、let7f 和 let7i 的表达量 | 第95-103页 |
| 5.3 讨论 | 第103-104页 |
| 5.4 小结 | 第104-105页 |
| 结论 | 第105页 |
| 本论文的创新点 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-115页 |
| 主要缩略词和中英文对照表（ABBREVIATION INDEX） | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-118页 |
| 作者简介 | 第118-119页 |
| 已发表或接收的文章 | 第119页 |
| 参与的基金项目和课题 | 第119页 |
