| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 文献综述 | 第15-37页 |
| 第一章 猪圆环病毒 2 型研究进展 | 第15-28页 |
| 1.1 PCV 的病原学特征 | 第15-19页 |
| 1.1.1 PCV2 的历史背景与分类 | 第15-16页 |
| 1.1.2 病毒的理化特性 | 第16页 |
| 1.1.3 病毒的培养特性 | 第16页 |
| 1.1.4 PCV 的基因组 | 第16-17页 |
| 1.1.5 PCV2 编码蛋白及功能 | 第17-19页 |
| 1.2 PCV2 的生活史及致病机制 | 第19-20页 |
| 1.3 PCV2 与宿主的相互作用 | 第20-25页 |
| 1.3.1 与 Rep 和 Rep’蛋白互作的宿主蛋白 | 第20-21页 |
| 1.3.2 与 Cap 蛋白互作的宿主蛋白 | 第21-23页 |
| 1.3.3 与 ORF3 编码蛋白（gpORF3）互作的宿主蛋白 | 第23-24页 |
| 1.3.4 PCV2 与宿主其他方面的互作机制 | 第24-25页 |
| 1.4 PCV2 的诊断 | 第25-27页 |
| 1.4.1 病毒的分离与鉴定 | 第25-26页 |
| 1.4.2 PCR 检测 | 第26页 |
| 1.4.3 间接免疫荧光检测 | 第26页 |
| 1.4.4 IPMA 检测 | 第26页 |
| 1.4.5 ELISA 检测 | 第26页 |
| 1.4.6 电镜技术 | 第26-27页 |
| 1.5 PCVD 的防制 | 第27-28页 |
| 第二章 纳米抗体研究进展 | 第28-35页 |
| 2.1 纳米抗体的结构特点 | 第28-30页 |
| 2.2 纳米抗体的特性 | 第30-31页 |
| 2.2.1 亲和力高 | 第30页 |
| 2.2.2 纳米抗体可以识别独特的构造表位 | 第30页 |
| 2.2.3 高稳定性和水溶性 | 第30页 |
| 2.2.4 易多聚化增强其功能 | 第30-31页 |
| 2.2.5 容易表达和大规模生产 | 第31页 |
| 2.3 纳米抗体的应用 | 第31-34页 |
| 2.3.1 治疗性应用 | 第31-33页 |
| 2.3.2 诊断性应用 | 第33页 |
| 2.3.3 工业性应用 | 第33-34页 |
| 2.4 纳米抗体的获取与表达 | 第34-35页 |
| 第三章 本研究目的意义及技术路线简介 | 第35-37页 |
| 3.1 研究的目的和意义 | 第35-36页 |
| 3.2 技术路线 | 第36-37页 |
| 试验研究 | 第37-120页 |
| 第四章 双峰驼酵母双杂交 VHH 单链抗体免疫文库的构建 | 第37-51页 |
| 4.1 材料 | 第39-40页 |
| 4.1.1 试验动物及疫苗 | 第39页 |
| 4.1.2 菌株及载体 | 第39页 |
| 4.1.3 试剂与仪器 | 第39页 |
| 4.1.4 引物设计 | 第39-40页 |
| 4.2 方法 | 第40-46页 |
| 4.2.1 动物免疫 | 第40页 |
| 4.2.2 淋巴细胞的分离 | 第40-41页 |
| 4.2.3 淋巴细胞总 RNA 的提取 | 第41-42页 |
| 4.2.4 VHH 片段的扩增 | 第42-43页 |
| 4.2.5 VHH 片段的浓缩 | 第43页 |
| 4.2.6 VHH 单链抗体免疫文库的构建 | 第43-45页 |
| 4.2.7 文库丰度测定 | 第45页 |
| 4.2.8 重组率和多样性检测 | 第45-46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-49页 |
| 4.3.1 淋巴细胞的分离及 RNA 提取 | 第46-47页 |
| 4.3.2 VHH 片段扩增 | 第47页 |
| 4.3.3 文库质量评价 | 第47-49页 |
| 4.4 讨论 | 第49-50页 |
| 4.5 小结 | 第50-51页 |
| 第五章 PCV2 Cap 蛋白纳米抗体的筛选及功能鉴定 | 第51-77页 |
| 5.1 材料 | 第51-52页 |
| 5.1.1 细胞、毒株、菌株及载体 | 第51页 |
| 5.1.2 试剂与仪器 | 第51-52页 |
| 5.2 方法 | 第52-62页 |
| 5.2.1 诱饵质粒 pGBKT7-Cap 的构建 | 第52-55页 |
| 5.2.2 文库筛选 | 第55-57页 |
| 5.2.3 Cap 蛋白与 VHHs 的原核表达及纯化 | 第57-60页 |
| 5.2.4 纳米抗体功能鉴定 | 第60-62页 |
| 5.3 结果与分析 | 第62-74页 |
| 5.3.1 诱饵质粒 pGBKT7-Cap 的构建 | 第62页 |
| 5.3.2 诱饵质粒的毒性及自激活检测 | 第62页 |
| 5.3.3 Cap 蛋白纳米抗体的筛选 | 第62-64页 |
| 5.3.4 Cap 蛋白纳米抗体的序列分析 | 第64-65页 |
| 5.3.5 Cap 蛋白与 VHHs 的原核表达及纯化 | 第65-69页 |
| 5.3.6 纳米抗体活性鉴定 | 第69-74页 |
| 5.4 讨论 | 第74-76页 |
| 5.4.1 文库筛选及序列分析 | 第74页 |
| 5.4.2 原核表达及纯化 | 第74-75页 |
| 5.4.3 纳米抗体功能及应用 | 第75-76页 |
| 5.5 小结 | 第76-77页 |
| 第六章 猪视网膜上皮细胞 cDNA 文库的构建及筛选 | 第77-91页 |
| 6.1 材料 | 第77页 |
| 6.1.1 细胞、毒株、菌株及载体 | 第77页 |
| 6.1.2 试剂与仪器 | 第77页 |
| 6.2 方法 | 第77-82页 |
| 6.2.1 猪视网膜上皮细胞培养及 PCV2 的增殖 | 第77-80页 |
| 6.2.2 PD3 细胞总 RNA 提取 | 第80页 |
| 6.2.3 第一链合成 | 第80页 |
| 6.2.4 LD-PCR 扩增双链 cDNA | 第80页 |
| 6.2.5 双链 cDNA 的沉淀和浓缩 | 第80-81页 |
| 6.2.6 构建酵母双杂交文库 | 第81页 |
| 6.2.7 文库质量评价 | 第81页 |
| 6.2.8 序列测定及生物信息学分析 | 第81页 |
| 6.2.9 Cap 互作蛋白的筛选 | 第81-82页 |
| 6.3 结果与分析 | 第82-88页 |
| 6.3.1 PD3 细胞增殖 PCV2 情况 | 第82-83页 |
| 6.3.2 PD3 细胞总 RNA 的提取 | 第83-84页 |
| 6.3.3 双链 cDNA 文库的琼脂糖凝胶电泳 | 第84页 |
| 6.3.4 文库丰度及质量评价 | 第84-85页 |
| 6.3.5 序列测定及生物信息学分析 | 第85-86页 |
| 6.3.6 Cap 互作蛋白的筛选 | 第86-88页 |
| 6.4 讨论 | 第88-90页 |
| 6.4.1 PCV2 细胞培养 | 第88页 |
| 6.4.2 文库构建 | 第88页 |
| 6.4.3 互作蛋白介绍 | 第88-90页 |
| 6.5 小结 | 第90-91页 |
| 第七章 C1QBP 与圆环病毒 Cap 蛋白相互作用的验证 | 第91-105页 |
| 7.1 材料 | 第91-92页 |
| 7.1.1 细胞、载体和菌株 | 第91页 |
| 7.1.2 主要试剂与主要仪器 | 第91-92页 |
| 7.1.3 引物设计 | 第92页 |
| 7.2 方法 | 第92-97页 |
| 7.2.1 C1QBP 序列分析 | 第92页 |
| 7.2.2 真核表达载体的构建 | 第92-93页 |
| 7.2.3 去内毒素质粒提取 | 第93页 |
| 7.2.4 细胞转染 | 第93-94页 |
| 7.2.5 免疫共沉淀 | 第94-95页 |
| 7.2.6 Western Blotting 分析 | 第95-96页 |
| 7.2.7 免疫荧光 | 第96页 |
| 7.2.8 C1QBP 在感染 PCV2 细胞中的变化 | 第96-97页 |
| 7.3 结果 | 第97-103页 |
| 7.3.1 C1QBP 的序列分析 | 第97-98页 |
| 7.3.2 真核表达载体的构建 | 第98-100页 |
| 7.3.3 转染效率检测 | 第100页 |
| 7.3.4 Cap-HA 和 flag-C1QBP 融合蛋白的表达 | 第100-101页 |
| 7.3.5 免疫共沉淀 | 第101页 |
| 7.3.6 激光共聚焦 | 第101-102页 |
| 7.3.7 C1QBP 在感染 PCV2 细胞中 mRNA 水平上的变化 | 第102页 |
| 7.3.8 C1QBP 在感染 PCV2 细胞中蛋白水平上的变化 | 第102-103页 |
| 7.4 讨论 | 第103-104页 |
| 7.5 小结 | 第104-105页 |
| 第八章 C1QBP 蛋白对 PCV2 增殖的影响 | 第105-120页 |
| 8.1 材料 | 第105-106页 |
| 8.1.1 载体、菌株及毒株 | 第105页 |
| 8.1.2 主要试剂与主要仪器 | 第105页 |
| 8.1.3 引物设计 | 第105-106页 |
| 8.2 方法 | 第106-111页 |
| 8.2.1 主要试剂配方 | 第106页 |
| 8.2.2 PCV2 DNA 的提取 | 第106-107页 |
| 8.2.3 相关载体构建 | 第107-109页 |
| 8.2.4 慢病毒包装及滴度检测 | 第109-110页 |
| 8.2.5 C1QBP 干扰慢病毒的干扰效率检测 | 第110页 |
| 8.2.6 实时定量 PCR 检测 | 第110-111页 |
| 8.2.7 C1QBP 对 PCV2 增殖的影响 | 第111页 |
| 8.2.8 C1QBP 在 PK15 和 PD3 细胞中表达分析 | 第111页 |
| 8.3 结果 | 第111-117页 |
| 8.3.1 CD513B-U6-neo 干扰慢病毒骨架载体的构建 | 第111-112页 |
| 8.3.2 C1QBP 干扰慢病毒的干扰效率检测 | 第112-114页 |
| 8.3.3 PCV2 的 Real-time PCR 标准曲线的建立 | 第114-115页 |
| 8.3.4 C1QBP 对 PCV2 增殖的影响 | 第115-116页 |
| 8.3.5 C1QBP 在 PK15 和 PD3 细胞中表达分析 | 第116-117页 |
| 8.4 讨论 | 第117-119页 |
| 8.5 小结 | 第119-120页 |
| 全文总结 | 第120-121页 |
| 论文创新点和下一步研究工作 | 第121-122页 |
| 创新点 | 第121页 |
| 下一步研究工作 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-142页 |
| 附录 | 第142-143页 |
| 致谢 | 第143-145页 |
| 作者简介 | 第145页 |
