| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第14-26页 |
| 第一章 维生素 C 促进细胞重编程研究进展 | 第14-18页 |
| 1.1 维生素 C 抗氧化性有利于细胞重编程 | 第14-15页 |
| 1.2 维生素 C 促进多能性基因表达 | 第15页 |
| 1.3 维生素 C 调控细胞表观修饰 | 第15-16页 |
| 1.3.1 维生素 C 调控 DNA 去甲基化修饰 | 第15-16页 |
| 1.3.2 维生素 C 调控组蛋白修饰 | 第16页 |
| 1.4 维生素 C 能提高细胞重编程的质量 | 第16-18页 |
| 第二章 胚胎干细胞中 microRNA 的调控作用 | 第18-26页 |
| 2.1 miRNAs 的生物学合成机制 | 第18-20页 |
| 2.2 ESC 中 miRNAs 的作用 | 第20-24页 |
| 2.2.1 ESC 中 miRNAs 表达模式 | 第21页 |
| 2.2.2 miRNAs 调控 ESC 核心转录因子的表达 | 第21-22页 |
| 2.2.3 miRNAs 可以调节 ESC 细胞周期 | 第22-24页 |
| 2.2.4 miRNAs 调控 ESC 的表观修饰 | 第24页 |
| 2.3 miRNAs 调控诱导多能性干细胞（iPSC）的产生 | 第24-25页 |
| 2.4 细胞状态之间的转变 | 第25-26页 |
| 实验研究 | 第26-80页 |
| 第三章 维生素 C 促进小鼠干细胞中多能性因子的表达 | 第26-45页 |
| 3.1 材料 | 第26-29页 |
| 3.1.1 细胞株、菌株与质粒 | 第26页 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| 3.1.3 酶及主要试剂 | 第27页 |
| 3.1.4 主要实验试剂制备 | 第27-29页 |
| 3.1.5 主要分析软件与数据库 | 第29页 |
| 3.2 方法与步骤 | 第29-35页 |
| 3.2.1 细胞培养与处理 | 第29-30页 |
| 3.2.2 碱性磷酸酯酶（AP）染色 | 第30页 |
| 3.2.3 基因芯片分析 | 第30-31页 |
| 3.2.4 细胞总 RNA 提取与逆转录 | 第31-32页 |
| 3.2.5 实时定量 PCR（qPCR）反应 | 第32-33页 |
| 3.2.6 BCA 蛋白定量 | 第33页 |
| 3.2.7 Western Blot 免疫杂交实验 | 第33-34页 |
| 3.2.8 细胞转染 | 第34-35页 |
| 3.2.9 双萤光素酶报告分析 | 第35页 |
| 3.3 结果 | 第35-43页 |
| 3.3.1 维生素 C 促进 mESC 的自我更新和克隆形态维持 | 第35-36页 |
| 3.3.2 基因芯片表明维生素 C 促进多能性基因表达 | 第36-38页 |
| 3.3.3 基因注释和通路分析维生素 C 诱导变化的基因 | 第38-40页 |
| 3.3.4 qPCR 验证维生素 C 上调干性因子表达 | 第40-41页 |
| 3.3.5 维生素 C 促进核心干性基因启动子活性 | 第41页 |
| 3.3.6 维生素 C 对干细胞信号通路调控研究 | 第41-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-44页 |
| 3.5 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 维生素 C 调控小鼠干细胞中 microRNAs 的表达 | 第45-66页 |
| 4.1 材料 | 第45-47页 |
| 4.1.1 质粒、菌株与细胞株 | 第45页 |
| 4.1.2 主要仪器与设备 | 第45-46页 |
| 4.1.3 酶及主要试剂 | 第46页 |
| 4.1.4 主要实验试剂制备 | 第46页 |
| 4.1.5 主要分析软件与数据库 | 第46-47页 |
| 4.2 研究方法与步骤 | 第47-54页 |
| 4.2.1 载体构建 | 第47-50页 |
| 4.2.2 细胞培养 | 第50页 |
| 4.2.3 细胞转染 | 第50页 |
| 4.2.4 细胞总 RNA 提取与逆转录 | 第50页 |
| 4.2.5 小 RNA 文库构建、miRNA 深度测序与数据分析 | 第50-52页 |
| 4.2.6 实时定量 PCR（qPCR）分析 | 第52-53页 |
| 4.2.7 Western Blot 免疫杂交实验 | 第53-54页 |
| 4.2.8 双萤光素酶报告分析 | 第54页 |
| 4.3 结果 | 第54-63页 |
| 4.3.1 载体构建和鉴定 | 第54-55页 |
| 4.3.2 维生素 C 促进小鼠干细胞特异表达 miRNAs 簇的表达 | 第55-58页 |
| 4.3.3 维生素 C 促进 Dlk1-Dio3 印记区 miRNAs 簇的表达 | 第58-59页 |
| 4.3.4 维生素 C 介导 miRNA 调控基因表达 | 第59-61页 |
| 4.3.5 实验验证 miRNA 对靶标抑制作用 | 第61-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-64页 |
| 4.5 小结 | 第64-66页 |
| 第五章 维生素 C 介导 miRNA 调控干细胞 DNA 去甲基化修饰 | 第66-77页 |
| 5.1 材料 | 第66-67页 |
| 5.1.1 质粒、细胞株 | 第66页 |
| 5.1.2 主要仪器与设备 | 第66页 |
| 5.1.3 酶及主要试剂 | 第66页 |
| 5.1.4 主要实验试剂制备 | 第66-67页 |
| 5.2 研究方法与步骤 | 第67-68页 |
| 5.2.1 细胞培养与转染 | 第67页 |
| 5.2.2 碱性磷酸酯酶染色 | 第67页 |
| 5.2.3 细胞总 RNA 提取及实时定量 PCR（qPCR）分析 | 第67页 |
| 5.2.4 Western Blot 免疫杂交实验 | 第67页 |
| 5.2.5 基因组 DNA 提取 | 第67页 |
| 5.2.6 甲基化 DNA 免疫共沉淀（MeDIP） | 第67-68页 |
| 5.3 结果 | 第68-75页 |
| 5.3.1 miR-143 促进小鼠胚胎干细胞多能性维持 | 第68-71页 |
| 5.3.2 维生素 C 通过 miR-143 抑制干细胞中 Dnmt3a 表达 | 第71-73页 |
| 5.3.3 维生素 C 促进多能性基因及干细胞特异性 miRNA 簇启动子区去甲基化 | 第73-74页 |
| 5.3.4 维生素 C 促进发育相关基因及 Dlk1-Dio3 印记区 IG-DMR 的羟甲基化水平 | 第74-75页 |
| 5.4 讨论 | 第75-76页 |
| 5.5 小结 | 第76-77页 |
| 第六章 讨论与结论 | 第77-80页 |
| 6.1 讨论 | 第77-79页 |
| 6.2 结论 | 第79-80页 |
| 创新点 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-90页 |
| 附录 | 第90-96页 |
| 缩略词 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 作者简介 | 第100页 |
