| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 新城疫及新城疫病毒概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 新城疫概述 | 第11页 |
| 1.1.2 新城疫病毒结构蛋白及功能 | 第11-13页 |
| 1.2 新城疫疫苗研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.1 活疫苗 | 第13-14页 |
| 1.2.2 灭活疫苗 | 第14页 |
| 1.2.3 亚单位疫苗 | 第14-15页 |
| 1.2.4 活载体疫苗 | 第15-16页 |
| 1.2.5 病毒样颗粒疫苗 | 第16-17页 |
| 1.2.6 反向遗传疫苗 | 第17页 |
| 1.2.7 DNA疫苗 | 第17-18页 |
| 1.3 DNA疫苗优化策略 | 第18-21页 |
| 1.3.1 密码子优化 | 第18-19页 |
| 1.3.2 优化载体 | 第19-20页 |
| 1.3.3 选用合适的分子佐剂 | 第20页 |
| 1.3.4 优化接种途径与接种方法 | 第20-21页 |
| 1.4 IL-12作为免疫佐剂的作用及应用 | 第21页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-33页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 病毒、质粒和菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 实验动物及攻毒试验场所 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 分子生物学软件 | 第23页 |
| 2.1.5 常用试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.1.6 主要仪器和设备 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 鸡IL-12基因及新城疫F基因的克隆 | 第24-27页 |
| 2.2.2 pCA-F和pCA-IL12质粒的构建、鉴定和准备 | 第27-29页 |
| 2.2.3 通过间接免疫荧光检测目的蛋白表达 | 第29-30页 |
| 2.3 攻毒保护实验 | 第30-33页 |
| 2.3.1 SPF鸡的免疫 | 第30-32页 |
| 2.3.2 血清中和试验 | 第32-33页 |
| 2.3.3 淋巴细胞增殖试验 | 第33页 |
| 2.3.4 病毒分离 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-43页 |
| 3.1 鸡IL-12基因和GM株F基因扩增结果 | 第33-34页 |
| 3.2 表达质粒的构建和鉴定 | 第34-36页 |
| 3.2.1 pCAG-F和pCAG-IL12重组菌液PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.2 pCAG-F和pCAG-IL12重组菌液测序鉴定 | 第35页 |
| 3.2.3 pCAG-F和pCAG-IL12重组质粒酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3 pCAG-F和pCAG-IL12重组质粒在 293T细胞中表达产物的检测 | 第36-37页 |
| 3.4 电穿孔技术对重组DNA疫苗pCAG-F免疫效果的影响 | 第37-40页 |
| 3.4.1 病毒中和试验结果 | 第37-38页 |
| 3.4.2 T淋巴细胞增殖结果 | 第38页 |
| 3.4.3 攻毒保护效果及病毒排毒情况 | 第38-40页 |
| 3.5 重组质粒pCAG-IL12对重组DNA疫苗pCAG-F免疫效果的影响 | 第40-43页 |
| 3.5.1 病毒中和试验结果 | 第40-41页 |
| 3.5.2 T淋巴细胞增殖结果 | 第41页 |
| 3.5.3 攻毒保护效果及病毒排毒情况 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 4.1 关于新城疫F基因疫苗的讨论 | 第43-44页 |
| 4.2 关于电穿孔方法增强DNA疫苗作用的探讨 | 第44-45页 |
| 4.3 探讨IL-12对DNA疫苗免疫增强作用 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录 | 第53页 |
