| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-26页 |
| ·癌症及其治疗现状 | 第12页 |
| ·聚酮化合物 | 第12-16页 |
| ·聚酮化合物简介 | 第12-13页 |
| ·聚酮化合物分类 | 第13页 |
| ·聚酮化合物合成酶 | 第13-15页 |
| ·Ⅰ型聚酮化合物合成酶 | 第15-16页 |
| ·组合生物合成 | 第16-18页 |
| ·组合生物合成概念 | 第16-17页 |
| ·组合生物合成的原理以及优点 | 第17页 |
| ·组合生物合成在PKS中的应用 | 第17-18页 |
| ·Fostriecin的研究 | 第18-24页 |
| ·天然产物Fostriecin类化合物的简介 | 第18-20页 |
| ·Fostriecin的生物作用机制 | 第20-22页 |
| ·FST全合成简介 | 第22页 |
| ·FST的生物合成介绍 | 第22-23页 |
| ·Fostriecin后修饰基因功能预测 | 第23-24页 |
| ·红霉素中KR的研究 | 第24-25页 |
| ·题依据和主要内容 | 第25-26页 |
| ·立题依据 | 第25页 |
| ·主要内容 | 第25-26页 |
| 2 FST产生菌基因导入系统建立和条件优化 | 第26-50页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·实验材料 | 第26-31页 |
| ·质粒和载体 | 第26页 |
| ·菌种 | 第26-27页 |
| ·实验所用试剂和试剂盒 | 第27页 |
| ·本实验所用仪器 | 第27-28页 |
| ·本实验过程培养基 | 第28-29页 |
| ·主要溶液 | 第29-31页 |
| ·抗生素及氨基酸 | 第31页 |
| ·溶菌酶、蛋白酶K溶液的配制 | 第31页 |
| ·工具酶 | 第31页 |
| ·其它药品及生化试剂 | 第31页 |
| ·PCR引物 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-41页 |
| ·大肠杆菌质粒的小量提取(SDS碱裂解法制备) | 第31-32页 |
| ·粉末链霉菌总DNA的小量提取制备 | 第32-33页 |
| ·粉末链霉菌总DNA的大量提取 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·大肠杆菌质粒转化 | 第34-35页 |
| ·DNA片段的琼脂糖凝胶回收纯化 | 第35页 |
| ·限制性单酶切和双酶切体系 | 第35页 |
| ·目的基因与不同载体的连接 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌菌种的保藏 | 第36页 |
| ·粉末链霉菌孢子悬液的制备 | 第36-37页 |
| ·PCR反应体系建立及步骤 | 第37页 |
| ·粉末链霉菌原生质体的制备,再生和转化 | 第37-39页 |
| ·大肠杆菌—链霉菌属间接合转移系统的建立 | 第39-40页 |
| ·链霉菌孢子的电击转化 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-49页 |
| ·三种基因导入方法的比较 | 第41-45页 |
| ·利用接合转移法试验pSET152空载体的转化 | 第41-42页 |
| ·利用PEG-介导粉末链霉菌原生质体转化 | 第42-45页 |
| ·电转化 | 第45页 |
| ·接合转移转化方法的条件优化 | 第45-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 3 粉末链霉菌酮基还原酶突变体的构建 | 第50-69页 |
| ·引言 | 第50页 |
| ·实验材料 | 第50-53页 |
| ·菌种 | 第50页 |
| ·质粒和载体 | 第50-51页 |
| ·主要仪器及设备 | 第51页 |
| ·主要生化试剂 | 第51-52页 |
| ·培养基 | 第52页 |
| ·主要溶液 | 第52-53页 |
| ·抗生素及氨基酸 | 第53页 |
| ·工具酶、溶菌酶溶液的配制 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-57页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化 | 第53页 |
| ·其它实验 | 第53页 |
| ·大肠杆菌与链霉菌之间的属间接合转移 | 第53页 |
| ·基因定点突变 | 第53-55页 |
| ·点杂交 | 第55-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-68页 |
| ·同源性比较 | 第57-59页 |
| ·pUCYG质粒的构建 | 第59-60页 |
| ·突变引物设计和突变载体构建 | 第60-63页 |
| ·重组载体pOJTA的构建及鉴定 | 第63-64页 |
| ·pOJTA质粒转化及粉末链霉菌染色体整合体的筛选,鉴定 | 第64-66页 |
| ·粉末链霉菌突变菌株FM的筛选 | 第66-68页 |
| ·本章小结 | 第68-69页 |
| 4 突变体发酵产物分析 | 第69-77页 |
| ·引言 | 第69页 |
| ·实验材料 | 第69-71页 |
| ·菌种 | 第69页 |
| ·主要仪器及设备 | 第69页 |
| ·主要生化试剂 | 第69-70页 |
| ·主要溶液 | 第70页 |
| ·主要培养基 | 第70-71页 |
| ·实验方法 | 第71-73页 |
| ·FST及类似物发酵工艺条件 | 第71页 |
| ·FST的生成曲线 | 第71页 |
| ·FST及其类似物的分析方法 | 第71页 |
| ·Fostriecin及衍生物紫外吸收及保留时间的确定 | 第71页 |
| ·柱层析方法 | 第71-72页 |
| ·FST制备 | 第72-73页 |
| ·结果分析 | 第73-76页 |
| ·FST生成曲线 | 第73-74页 |
| ·Fostriecin及类似物的紫外吸收及保留时间确定 | 第74-75页 |
| ·突变菌株FM发酵产物HPLC分析 | 第75-76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 讨论与总结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 附录A Fostriecin电喷雾电离质谱图(ESI-MS) | 第82-83页 |
| 附录B Fostriecin ~1H NMR谱图 | 第83-86页 |
| 附录C1 pUCTA质粒中外源突变片段测序图谱(正向) | 第86-87页 |
| 附录C2 pUCTA质粒中外源突变片段测序图谱(正向) | 第87-88页 |
| 附录C3 pUCTA质粒中外源突变片段测序图谱(反向) | 第88-89页 |
| 附录C4 pUCTA质粒中外源突变片段测序图谱(正向) | 第89-90页 |
| 附录C5 pUCTA质粒中外源突变片段测序图谱(反向) | 第90-91页 |
| 附录D1 突变菌株中突变位点M2测序图谱 | 第91-92页 |
| 附录D2 突变菌株中突变位点M1测序图谱 | 第92-93页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
