| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-32页 |
| 1.1 嗜热酶 | 第10-11页 |
| 1.2 酯酶 | 第11-12页 |
| 1.2.1 嗜热酯酶EST2 | 第12页 |
| 1.3 GH11木聚糖酶 | 第12-16页 |
| 1.3.1 GH11木聚糖酶催化机理 | 第14页 |
| 1.3.2 GH11木聚糖酶应用 | 第14-15页 |
| 1.3.3 嗜热木聚糖酶CbX | 第15-16页 |
| 1.4 嗜热酶异源高效表达研究进展 | 第16-20页 |
| 1.4.1 大肠杆菌表达系统 | 第16-19页 |
| 1.4.2 毕赤酵母表达系统 | 第19-20页 |
| 1.5 酶分子最适pH值改造研究现状 | 第20-26页 |
| 1.5.1 影响催化残基功能基团pKa的因素 | 第20-25页 |
| 1.5.2 最适pH值改造研究方法介绍 | 第25-26页 |
| 1.6 相关生物信息学方法介绍 | 第26-29页 |
| 1.6.1 人工神经网络分析 | 第26-28页 |
| 1.6.2 Lasso回归分析 | 第28-29页 |
| 1.7 立题依据 | 第29-32页 |
| 第二章 嗜热酯酶EST2在大肠杆菌及毕赤酵母中的克隆、表征以及高效表达 | 第32-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第32页 |
| 2.1.2 试剂与材料 | 第32-34页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 2.2.1 EST2基因的克隆 | 第34-35页 |
| 2.2.2 基因工程菌的构建及重组蛋白表达 | 第35-36页 |
| 2.2.3 重组EST2的分离纯化 | 第36-37页 |
| 2.2.4 EST2活力测定及性质表征 | 第37-38页 |
| 2.2.5 大肠杆菌高密度发酵 | 第38-39页 |
| 2.2.6 毕赤酵母高密度发酵 | 第39-40页 |
| 2.3 结果和讨论 | 第40-49页 |
| 2.3.1 EST2基因的克隆 | 第40-41页 |
| 2.3.2 重组质粒的构建以及阳性克隆鉴定 | 第41-42页 |
| 2.3.3 重组EST2的表达及纯化 | 第42-43页 |
| 2.3.4 不同宿主表达的重组EST2性质表征及比较 | 第43-44页 |
| 2.3.5 EST2在毕赤酵母中的高密度发酵 | 第44-46页 |
| 2.3.6 EST2大肠杆菌高密度发酵 | 第46-47页 |
| 2.3.7 EST2大肠杆菌发酵条件优化 | 第47-49页 |
| 2.4 小结 | 第49-52页 |
| 第三章 嗜热木聚糖酶CbX-CD在大肠杆菌和毕赤酵母中的克隆、表征以及高效表达 | 第52-62页 |
| 3.1 材料和方法 | 第52-54页 |
| 3.1.1 CbX-CD基因的克隆与重组蛋白表达 | 第52-53页 |
| 3.1.2 重组CbX-CD的分离纯化 | 第53页 |
| 3.1.3 重组CbX-CD酶学性质表征 | 第53-54页 |
| 3.1.4 重组CbX-CD大肠杆菌高密度发酵 | 第54页 |
| 3.2 结果和讨论 | 第54-60页 |
| 3.2.1 CbX-CD基因克隆 | 第54-55页 |
| 3.2.2 重组CbX-CD摇瓶表达及分离纯化 | 第55-56页 |
| 3.2.3 重组CbX-CD酶学性质表征 | 第56-58页 |
| 3.2.4 CbX-CD大肠杆菌高密度发酵及发酵条件优化 | 第58-60页 |
| 3.3 小结 | 第60-62页 |
| 第四章 基于序列统计分析的GH11家族木聚糖酶pH适应性研究 | 第62-80页 |
| 4.1 实验方法 | 第62-66页 |
| 4.1.1 GH11家族木聚糖酶序列和功能信息库构建 | 第62-63页 |
| 4.1.2 多序列比对与系统进化树构建 | 第63页 |
| 4.1.3 多序列比对结果数值表征 | 第63页 |
| 4.1.4 方差分析以及人工神经网络分析 | 第63-64页 |
| 4.1.5 Lasso线性回归分析 | 第64页 |
| 4.1.6 突变体构建以及性质测定 | 第64-66页 |
| 4.1.7 蛋白质结构建模以及分析 | 第66页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第66-78页 |
| 4.2.1 GH11家族木聚糖酶序列和功能信息库构建 | 第66页 |
| 4.2.2 多序列比对与系统进化树构建 | 第66-68页 |
| 4.2.3 人工神经网络分析以及Lasso线性回归分析 | 第68-69页 |
| 4.2.4 突变体设计 | 第69-70页 |
| 4.2.5 突变体性质表征 | 第70-71页 |
| 4.2.6 同源建模以及机理分析 | 第71-78页 |
| 4.3 小结 | 第78-80页 |
| 创新点 | 第80-82页 |
| 展望 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-94页 |
| 附录 | 第94-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 攻读硕士期间学术论文情况 | 第108-110页 |
