| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 英文缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| ·单纯疱疹病毒Ⅱ型基本概述 | 第15-16页 |
| ·HSV的形态与结构 | 第16页 |
| ·HSV-2 基因组结构和基因表达 | 第16-18页 |
| ·HSV-2 基因组结构的概述 | 第16-17页 |
| ·HSV-2 的基因表达 | 第17-18页 |
| ·HSV的LAT基因 | 第18-19页 |
| ·LAT家族 | 第18页 |
| ·LAT的开放读码框 | 第18-19页 |
| ·HSV的LAT基因的抗凋亡作用 | 第19-23页 |
| ·LAT的抗凋亡作用 | 第19-20页 |
| ·LAT抗凋亡作用的区域 | 第20-21页 |
| ·LAT抗凋亡的机制 | 第21-23页 |
| ·LAT抗凋亡作用的研究前景 | 第23页 |
| ·本课题的研究意义和主要内容 | 第23-26页 |
| ·本课题的研究意义 | 第23-25页 |
| ·本课题的研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 单纯疱疹病毒Ⅱ型LAT基因开放读码框3 真核表达载体的构建 | 第26-45页 |
| ·前言 | 第26页 |
| ·实验材料 | 第26-30页 |
| ·主要实验仪器和耗材 | 第26-27页 |
| ·细胞、病毒株、菌株和质粒 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-29页 |
| ·溶液和培养基 | 第29-30页 |
| ·技术路线 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-40页 |
| ·Vero细胞复苏 | 第30页 |
| ·Vero细胞传代培养 | 第30-31页 |
| ·Vero细胞冻存 | 第31页 |
| ·HSV-2 333 标准株的培养 | 第31页 |
| ·HSV-2 333 基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增HSV-2 LAT 基因ORF3 序列 | 第32-35页 |
| ·真核表达质粒pEGFP-C2 的扩增 | 第35-37页 |
| ·pEGFP-C2 质粒和HSV-2 LAT ORF3 片段的双酶切 | 第37页 |
| ·酶切产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| ·回收纯化酶切产物 | 第37-38页 |
| ·HSV-2 LAT ORF3 片段与质粒pEGFP-C2 的连接 | 第38页 |
| ·E.coli Top10 感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·阳性菌落的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组真核表达载体pEGFP-ORF3 的提取 | 第39页 |
| ·重组真核表达载体pEGFP-ORF3 的双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定酶切产物 | 第40页 |
| ·重组质粒pEGFP-ORF3 上ORF3 序列的测序鉴定 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-44页 |
| ·HSV-2 333 标准株基因组DNA的提取 | 第40页 |
| ·HSV-2 LAT基因ORF3 序列的PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·阳性菌落的PCR鉴定 | 第41页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pEGFP-ORF3 的测序鉴定 | 第42-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第三章 单纯疱疹病毒Ⅱ型LAT基因开放读码框3 在Vero细胞中的表达及鉴定 | 第45-58页 |
| ·前言 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·主要实验仪器和耗材 | 第45-46页 |
| ·细胞、菌株和质粒 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·溶液 | 第46-47页 |
| ·技术路线 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-53页 |
| ·无内毒素质粒的提取 | 第47-48页 |
| ·质粒浓度的测定 | 第48页 |
| ·Vero细胞的培养 | 第48-49页 |
| ·重组质粒转染Vero细胞 | 第49-53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-57页 |
| ·Vero细胞的培养 | 第53页 |
| ·质粒在Vero细胞中的表达 | 第53-54页 |
| ·瞬时转染效率条件的优化 | 第54-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第四章 单纯疱疹病毒Ⅱ型LAT基因开放读码框3 对Vero细胞的抗凋亡作用 | 第58-72页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·实验材料 | 第58-60页 |
| ·主要实验仪器和耗材 | 第58-59页 |
| ·质粒和细胞 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·溶液 | 第60页 |
| ·技术路线 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-64页 |
| ·Vero细胞的培养 | 第61页 |
| ·质粒转染Vero细胞 | 第61页 |
| ·MTT法检测细胞增殖 | 第61页 |
| ·顺铂诱导细胞凋亡 | 第61-62页 |
| ·Giemsa染色检测细胞核 | 第62页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第62-64页 |
| ·统计学分析实验数据 | 第64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-72页 |
| ·质粒pEGFP-ORF3 在Vero细胞中表达的荧光特点 | 第64-65页 |
| ·质粒pEGFP-ORF3 对细胞增殖的影响 | 第65页 |
| ·顺铂诱导Vero细胞凋亡模型的建立 | 第65-67页 |
| ·顺铂诱导各组细胞凋亡后荧光显微镜形态学分析 | 第67-68页 |
| ·Giemsa染色观察细胞核变化 | 第68页 |
| ·MTT法分析细胞增殖 | 第68-69页 |
| ·流式细胞术分析细胞凋亡 | 第69-72页 |
| 结论与展望 | 第72-74页 |
| 结论 | 第72页 |
| 本论文的创新之处 | 第72页 |
| 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附件 | 第82页 |
