| 中文摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-33页 |
| 1.1 植物生物质抗降解屏障 | 第13-18页 |
| 1.1.1 植物细胞壁的组织结构层次 | 第13-15页 |
| 1.1.2 木质纤维素的组分 | 第15-16页 |
| 1.1.3 纤维素的组成结构 | 第16-18页 |
| 1.2 主要高效降解纤维素酶系统 | 第18-21页 |
| 1.2.1 高效降解纤维素的微生物来源 | 第18页 |
| 1.2.2 “非复合体”纤维素酶系 | 第18-19页 |
| 1.2.3 “复合体型”纤维素酶系 | 第19-20页 |
| 1.2.4 “非复合体细胞结合型”纤维素酶系 | 第20-21页 |
| 1.3 纤维素酶相关生物信息学研究进展 | 第21-26页 |
| 1.3.1 糖苷水解酶序列分类法 | 第21-23页 |
| 1.3.2 纤维素酶自动功能注释与混杂性 | 第23-26页 |
| 1.4 酶混杂性(promiscuity)研究 | 第26-31页 |
| 1.4.1 混杂性分类层次 | 第26-27页 |
| 1.4.2 引起酶混杂性的条件 | 第27-28页 |
| 1.4.3 引起酶混杂性机制 | 第28-30页 |
| 1.4.4 混杂性与蛋白质工程 | 第30-31页 |
| 1.5 立题依据 | 第31-33页 |
| 第二章 纤维素酶活性架构生物信息学分析 | 第33-51页 |
| 2.1 材料与方法 | 第33-35页 |
| 2.1.1 生物信息学分析软件与网站 | 第33页 |
| 2.1.2 数据获取及筛选 | 第33页 |
| 2.1.3 序列比对与结构比对 | 第33-34页 |
| 2.1.4 氨基酸频率统计 | 第34页 |
| 2.1.5 纤维素酶家族活性架构与活性中心序列谱 | 第34-35页 |
| 2.1.6 活性中心序列谱稳定性检验 | 第35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-49页 |
| 2.2.1 纤维素酶混杂性的表现形式 | 第35-37页 |
| 2.2.2 纤维素酶混杂性可能机制 | 第37-41页 |
| 2.2.3 纤维素酶混杂性的共同结构基础 | 第41-49页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第49-51页 |
| 第三章 TrCel 12A酶分子活性架构关键氨基酸突变及其功能研究 | 第51-75页 |
| 3.1 材料与方法 | 第51-63页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第51页 |
| 3.1.2 主要的仪器及试剂 | 第51-52页 |
| 3.1.3 主要的培养基 | 第52-53页 |
| 3.1.4 主要引物 | 第53页 |
| 3.1.5 突变质粒构建与扩增 | 第53-56页 |
| 3.1.6 毕赤酵母GS115异源表达突变蛋白及纯化 | 第56-59页 |
| 3.1.7 突变蛋白催化动力学常数Kcat、Km测定 | 第59页 |
| 3.1.8 等温量热滴定(ITC)测定突变蛋白热力学常数 | 第59-61页 |
| 3.1.9 荧光辅助糖电泳(FACE)分析突变蛋白酶解产物谱变化 | 第61-63页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第63-74页 |
| 3.2.1 eg3基因关键位点W7位点的选择 | 第63-64页 |
| 3.2.2 eg3基因关键位点氨基酸突变、质粒构建及检测 | 第64-65页 |
| 3.2.3 活性架构W7位点突变蛋白表达与纯化 | 第65-66页 |
| 3.2.4 活性架构W7位点突变蛋白CMC酶活力测定 | 第66-67页 |
| 3.2.5 活性架构W7、W22位点突变蛋白Kcat、Km测定 | 第67-68页 |
| 3.2.6 活性架构W7、W22位点突变对酶分子与CMC结合能力影响 | 第68-70页 |
| 3.2.7 活性架构W7位点对降解RAC底物的影响 | 第70-71页 |
| 3.2.8 结构生物信息学分析活性架构W7、W22位点突变对TrCel12A酶分子功能的影响 | 第71-74页 |
| 3.3 小结 | 第74-75页 |
| 第四章 TrCel12A酶分子活性架构决定多底物特异性关键氨基酸功能研究 | 第75-87页 |
| 4.1 材料与方法 | 第75-77页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第75页 |
| 4.1.2 主要仪器及培养基 | 第75-76页 |
| 4.1.3 主要引物 | 第76页 |
| 4.1.4 重组质粒构建与扩增 | 第76页 |
| 4.1.5 毕赤酵母GS115异源表达突变蛋白及纯化 | 第76-77页 |
| 4.1.6 突变蛋白性质检测 | 第77页 |
| 4.1.7 荧光辅助糖电泳(FACE)分析突变蛋白酶解产物谱变化 | 第77页 |
| 4.2 结果与分析 | 第77-84页 |
| 4.2.1 突变关键氨基酸位点序列与结构分析 | 第77-79页 |
| 4.2.2 基因egl3关键氨基酸的定点突变 | 第79-80页 |
| 4.2.3 突变体蛋白的表达纯化 | 第80-81页 |
| 4.2.4 突变蛋白酶活性质测定 | 第81-83页 |
| 4.2.5 突变体蛋白对降解RAC底物的影响 | 第83-84页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第84-87页 |
| 第五章 TrCel12A酶分子活性架构关键氨基酸与底物相互作用机理分析 | 第87-97页 |
| 5.1 材料与方法 | 第87-90页 |
| 5.1.1 菌株与与质粒 | 第87页 |
| 5.1.2 主要仪器及试剂 | 第87-88页 |
| 5.1.3 主要培养基 | 第88页 |
| 5.1.4 重组质粒构建与扩增 | 第88页 |
| 5.1.5 毕赤酵母GH115异源表达突变蛋白及纯化 | 第88-89页 |
| 5.1.6 突变蛋白酶活性质检测 | 第89-90页 |
| 5.1.7 突变蛋白催化动力学常数Kcat、Km测定 | 第90页 |
| 5.1.8 等温量热滴定(ITC)测定突变蛋白热力学常数 | 第90页 |
| 5.1.9 突变关键氨基酸位点结构分析 | 第90页 |
| 5.2 结果与分析 | 第90-94页 |
| 5.2.1 活性架构N2O位点蛋白表达与纯化 | 第90-91页 |
| 5.2.2 N2O突变对酶分子与底物相互作用的影响 | 第91-94页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第94-97页 |
| 全文总结与展望 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第109-110页 |
| 附件 | 第110页 |
