摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-13页 |
文献综述 | 第14-18页 |
1.1 MYC基因概述 | 第14-15页 |
1.1.1 MYC基因的发现及功能 | 第14页 |
1.1.2 MYCN基因概述 | 第14-15页 |
1.1.3 MYCN基因在神经母细胞瘤中的功能 | 第15页 |
1.2 MINA基因概述 | 第15-18页 |
1.2.1MINA基因的发现及其结构 | 第15-16页 |
1.2.2 MINA与肿瘤的发生发展 | 第16-18页 |
第二章 引言 | 第18-20页 |
2.1 研究背景与目的意义 | 第18页 |
2.2 主要研究内容 | 第18-19页 |
2.3 技术路线 | 第19-20页 |
第三章 MYCN和MINA在神经母细胞瘤细胞中的含量分析 | 第20-30页 |
3.1 材料和试剂仪器 | 第20-23页 |
3.1.1 实验材料 | 第20页 |
3.1.2 实验仪器 | 第20页 |
3.1.3 实验试剂 | 第20-21页 |
3.1.4 溶液配制 | 第21-23页 |
3.2 实验方法 | 第23-26页 |
3.2.1 临床预后数据分析 | 第23页 |
3.2.2 细胞培养 | 第23-25页 |
3.2.3 总蛋白提取 | 第25页 |
3.2.4 Western Blot检测目的蛋白 | 第25-26页 |
3.3 结果与分析 | 第26-28页 |
3.3.1 MYCN和MINA与神经母细胞瘤预后密切相关 | 第26-28页 |
3.3.2 MYCN与MINA在神经母细胞瘤细胞系的表达 | 第28页 |
3.4 讨论与小结 | 第28-30页 |
3.4.1 讨论 | 第28-29页 |
3.4.2 小结 | 第29-30页 |
第四章 MINA干涉和过表达载体的构建 | 第30-40页 |
4.1 材料和试剂仪器 | 第30-32页 |
4.1.1 实验材料 | 第30-31页 |
4.1.2 实验仪器 | 第31页 |
4.1.3 实验试剂 | 第31-32页 |
4.1.4 溶液配制 | 第32页 |
4.2 实验方法 | 第32-38页 |
4.2.1 基因组提取 | 第32-33页 |
4.2.2 MINA全长目的片段扩增 | 第33页 |
4.2.3 目的片段回收 | 第33页 |
4.2.4 干涉载体构建 | 第33-34页 |
4.2.5 载体酶切 | 第34页 |
4.2.6 连接与转化 | 第34-35页 |
4.2.7 筛选阳性克隆 | 第35页 |
4.2.8 慢病毒转染、感染 | 第35-36页 |
4.2.9 定量PCR | 第36-38页 |
4.3 结果与分析 | 第38-39页 |
MINA干涉检测 | 第38-39页 |
4.4 讨论与小结 | 第39-40页 |
4.4.1 讨论 | 第39页 |
4.4.2 小结 | 第39-40页 |
第五章 MYCN与MINA对神经母细胞瘤细胞生长、增殖的影响 | 第40-60页 |
5.1 材料和试剂仪器 | 第40-45页 |
5.1.1 实验材料 | 第40页 |
5.1.2 实验仪器 | 第40-41页 |
5.1.3 实验试剂 | 第41-42页 |
5.1.4 溶液配制 | 第42-45页 |
5.2 实验方法 | 第45-48页 |
5.2.1 细胞培养 | 第45-46页 |
5.2.2 慢病毒转染、感染 | 第46页 |
5.2.3 MTT方法测定细胞增殖 | 第46-47页 |
5.2.4 BrdU标记荧光染色 | 第47-48页 |
5.2.5 软琼脂克隆形成实验 | 第48页 |
5.3 结果分析与分析 | 第48-57页 |
5.3.1 在BE(2)-C细胞中干涉MYCN抑制细胞增殖 | 第48-50页 |
5.3.2 在BE(2)-C细胞中干涉MINA抑制细胞增殖 | 第50-52页 |
5.3.3 在干涉MYCN的BE(2)-C细胞中过表达MINA促进细胞增殖 | 第52-54页 |
5.3.4 在SHEP1中过表达MYCN促进细胞增殖 | 第54-55页 |
5.3.5 过表达MYCN的SHEP1中干涉MINA抑制细胞生长增殖 | 第55-56页 |
5.3.6 MYCN与MINA表达相关 | 第56-57页 |
5.4 讨论与小结 | 第57-60页 |
第六章 MYCN结合在MINA启动子区域 | 第60-72页 |
6.1 材料和试剂仪器 | 第60-63页 |
6.1.1 实验材料 | 第60页 |
6.1.2 实验仪器 | 第60-61页 |
6.1.3 实验试剂 | 第61页 |
6.1.4 溶液配制 | 第61-63页 |
6.2 实验方法 | 第63-69页 |
6.2.1 细胞培养 | 第63-64页 |
6.2.2 慢病毒转染、感染 | 第64页 |
6.2.3 实时荧光定量PCR | 第64-67页 |
6.2.4 染色质免疫共沉淀(ChIP)检测MYCN和MINA的结合 | 第67-69页 |
6.3 结果与分析 | 第69-71页 |
6.3.1 超声破碎检测 | 第69页 |
6.3.2 MYCN结合在MINA的启动子上 | 第69-71页 |
6.4 讨论与小结 | 第71-72页 |
第七章 全文总结 | 第72-74页 |
参考文献 | 第74-82页 |
缩略词表 | 第82-84页 |
硕士在读期间发表的文章及参研课题情况 | 第84-86页 |
致谢 | 第86页 |