| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号表 | 第7-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 沙门菌研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 沙门菌特性 | 第12-13页 |
| 1.1.2 沙门菌危害程度 | 第13-14页 |
| 1.1.3 沙门菌的诊断与防治 | 第14-15页 |
| 1.2 超氧化物歧化酶研究现状 | 第15-22页 |
| 1.2.1 超氧化物歧化酶作用 | 第16页 |
| 1.2.2 超氧化物岐化酶种类 | 第16-17页 |
| 1.2.3 超氧化物歧化酶的生理功能 | 第17-18页 |
| 1.2.4 超氧化物歧化酶的应用 | 第18-19页 |
| 1.2.5 超氧化物歧化酶活性检测 | 第19页 |
| 1.2.6 超氧化物歧化酶与自噬 | 第19-22页 |
| 第2章 沙门菌sodA缺失株的构建及生物学特性研究 | 第22-40页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要材料 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂的配置 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 PCR引物的设计及合成 | 第23-24页 |
| 2.2.2 菌种的复苏、活化 | 第24页 |
| 2.2.3 打靶片段的扩增及回收 | 第24-25页 |
| 2.2.4 SM52电转感受态的制备及SM52-pKD46的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.5 SM52-pKD46电转感受态的制备及sod A缺失株的构建 | 第26页 |
| 2.2.6 SM52Δsod A::Cm电转感受态的制备及缺失株Cm片段的去除 | 第26-27页 |
| 2.2.7 SM52Δsod A回补株的构建 | 第27页 |
| 2.2.8 生长曲线的测定 | 第27页 |
| 2.2.9 运动性检测 | 第27页 |
| 2.2.10 抗氧胁迫胁迫能力测定 | 第27-28页 |
| 2.2.11 菌膜形成能力 | 第28页 |
| 2.2.12 ROS测定 | 第28页 |
| 2.2.13 环境压力实验 | 第28-29页 |
| 2.2.14 SOD活性实验 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-38页 |
| 2.3.1 打靶片段的扩增及回收 | 第29-30页 |
| 2.3.2 SM52-pKD46的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.3 sod A缺失株的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.4 缺失株Cm片段的去除 | 第32页 |
| 2.3.5 SM52Δsod A的互补株SM52CΔsodA的鉴定 | 第32页 |
| 2.3.6 生长曲线测定 | 第32-33页 |
| 2.3.7 运动性检测 | 第33-34页 |
| 2.3.8 菌膜形成能力测定 | 第34-35页 |
| 2.3.9 抗氧胁迫胁迫能力测定 | 第35-36页 |
| 2.3.10 ROS测定 | 第36-37页 |
| 2.3.11 活性检测 | 第37页 |
| 2.3.12 环境压力实验 | 第37-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第3章 鼠伤寒沙门菌超氧化物歧化酶SodA基因的表达及酶学性质研究 | 第40-56页 |
| 3.1 材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 菌种与载体 | 第40页 |
| 3.1.2 主要试剂和培养基 | 第40页 |
| 3.1.3 主要培养基及试剂的配制 | 第40-41页 |
| 3.1.4 主要实验仪器 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-47页 |
| 3.2.1 菌种复苏 | 第41页 |
| 3.2.2 细菌基因组的提取 | 第41页 |
| 3.2.3 SodA基因引物设计 | 第41-42页 |
| 3.2.4 SodA基因PCR扩增、测序 | 第42页 |
| 3.2.5 小量质粒的提取 | 第42-43页 |
| 3.2.6 目的基因片段的酶切 | 第43页 |
| 3.2.7 目的基因产物的回收和纯化 | 第43页 |
| 3.2.8 目的基因产物与pET-28a载体的连接 | 第43页 |
| 3.2.9 感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| 3.2.10 重组质粒热击转化感受态细胞 | 第44页 |
| 3.2.11 重组菌的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.12 外源基因在重组菌中的诱导表达 | 第45页 |
| 3.2.13 目的蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第45-46页 |
| 3.2.14 包涵体的提取 | 第46页 |
| 3.2.15 蛋白纯化 | 第46页 |
| 3.2.16 SOD活性测定方法 | 第46页 |
| 3.2.17 pH对SodA蛋白活性的影响 | 第46页 |
| 3.2.18 温度对SodA活性的影响 | 第46页 |
| 3.2.19 SodA蛋白的热稳定性 | 第46-47页 |
| 3.2.20 乙醇对SodA蛋白活性的影响 | 第47页 |
| 3.2.21 金属离子对SodA蛋白活性的影响 | 第47页 |
| 3.2.22 抑制剂对SodA活性的影响 | 第47页 |
| 3.2.23 重组酶催化动力学 | 第47页 |
| 3.3 结果 | 第47-53页 |
| 3.3.1 SodA基因的克隆 | 第47-48页 |
| 3.3.2 重组表达质粒的鉴定 | 第48页 |
| 3.3.3 pET-28a-sodA的诱导表达与纯化 | 第48-49页 |
| 3.3.4 温度对SodA蛋白活性的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.5 温度对SodA蛋白稳定性的影响 | 第50页 |
| 3.3.6 pH对SodA蛋白活性的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.7 乙醇对SodA蛋白活性的影响 | 第51页 |
| 3.3.8 抑制剂对SodA蛋白活性的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.9 金属离子对酶活力的影响 | 第52页 |
| 3.3.10 重组酶催化动力学 | 第52-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-56页 |
| 第4章 鼠伤寒沙门菌sodA基因对巨噬细胞自噬的影响 | 第56-64页 |
| 4.1 材料 | 第56页 |
| 4.1.1 菌株 | 第56页 |
| 4.1.2 细胞与主要试剂 | 第56页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第56页 |
| 4.2 方法 | 第56-58页 |
| 4.2.1 细菌培养和定量 | 第56-57页 |
| 4.2.2 细胞培养 | 第57页 |
| 4.2.3 细胞感染模型 | 第57页 |
| 4.2.4 共聚焦显微镜检测LC3-Ⅱ蛋白 | 第57-58页 |
| 4.2.5 蛋白免疫印迹(Western blot, WB )检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1 和p62 | 第58页 |
| 4.2.6 细胞内活菌计数 | 第58页 |
| 4.2.7 统计学处理 | 第58页 |
| 4.3 结果 | 第58-62页 |
| 4.3.1 荧光共聚焦检测LC3-Ⅱ | 第58-59页 |
| 4.3.2 WB检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1 和p62 | 第59-61页 |
| 4.3.3 细胞内活菌计数 | 第61-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-64页 |
| 第5章 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 硕士期间的研究成果 | 第75页 |
